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Desenvolvimento de método de transformação genética para diferentes espécies de levedura

Juliana Ferreira de Melo Elisabete José Vicente; M. E Camargo; Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV (2. 2003 São Paulo)

Resumos São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP

São Paulo Comissão de Pesquisa do ICB/USP 2003

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  • Título:
    Desenvolvimento de método de transformação genética para diferentes espécies de levedura
  • Autor: Juliana Ferreira de Melo
  • Elisabete José Vicente; M. E Camargo; Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV (2. 2003 São Paulo)
  • Assuntos: MICROBIOLOGIA
  • É parte de: Resumos São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP
  • Notas: Disponível em CD-ROM
  • Descrição: Objetivos: Determinar a capacidade de transformação do vetor pUCGC em diferentes espécies de leveduras de interesse biotecnológicos e leveduras filogeneticamente próximas a Saccharomyces cerevisiae. Métodos e Resultados: Por ser um organismo eucarionte, a levedura é capaz de realizar modificações pós-traducionais das proteínas. Conseqüentemente a levedura apresenta enormes vantagens para ser empregada como hospedeira de plasmídios recombinantes portadores de informações genéticas provenientes de outros organismos. Neste trabalho foram utilizadas linhagens selecionadas de Saccharomyces cerevisie, Schizosaccharomyces pombe, Pichia pastoris, Cândida tropicalis. Estas linhagens foram transformadas pelo método de Acetato de Lítio, utilizando-se como vetor de transformação que contém o fragmento CGC, 7,8Kb, cassete de expressão contendo o cDNA da glicoamilase de Aspergillus awamori (Camargo, 2001). Este vetor possui as extremidades do gene CAN 1 de Saccharomyces cerevisiae através de recombinação homóloga e causa a disrupção gênica pela sua integração na região homóloga ao gene CAN 1. Linhagens de levedura com o gene alelo CAN 1 funcional são sensíveis à um aminoácido básico análogo da arginina, a L-canavanina, um potente inibidor de crescimento de muitos microrganismos. Após a transformação, a seleção dos transformantes foi feita pelo cultivo em meio mínimo SD, acrescido de L-canavanina, sendo analisados quanto à capacidade de
    produzir halos de amilolise em meio sólido contendo 0,5% de amido. Para a seleção dos transformantes, as diferentes linhagens de levedura precisam ser incubadas por diferentes períodos de tempo. Até o momento, já foram transformadas com sucesso várias linhagens de Saccharomyces cerevisiae de procedência industrial Conclusão: O método apresentado se mostrou eficiente para a transformação de várias leveduras selvagens selecionadas
  • Editor: São Paulo Comissão de Pesquisa do ICB/USP
  • Data de criação/publicação: 2003
  • Formato: Poster 112.
  • Idioma: Português
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