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Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida.

Iwashita, Claudia

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Biotecnologia 2012-03-19

Acesso online. A biblioteca também possui exemplares impressos.

  • Título:
    Novas estratégias de purificação dos fatores de coagulação Fator VIII e Proteína C a partir de plasma humano empregando cromatografia líquida.
  • Autor: Iwashita, Claudia
  • Orientador: Cheng, Elisabeth
  • Assuntos: Cromatografia Líquida; Fatores De Coagulação Sanguínea; Plasma; Proteínas; Blood Coagulation Factors; Liquid Chromatography; Proteins
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Notas Locais: Programa Interunidades em Biotecnologia EP/FMVZ/IPT/IB/ICB/I. BUTANTAN;Nome do Programa Interunidades no site do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo
  • Descrição: Neste trabalho estudou-se a purificação de fator VIII de coagulação (FVIII) e da Proteína C (PC) por cromatografia. Em coluna ANX Sepharose FF como primeira etapa de purificação do plasma permite a eluição do FVIII e da PC com bom fator de purificação, mas não a separação destas. Propomos a separação de FVIII e PC empregando cromatografia de afinidade a metal (IMAC) empregando Cu2+, Ni2+, Zn2+, Co2+ e Fe3+ e dessorção empregando imidazol, cloreto de amônio e variação de pH. Em colunas de Fe3+ e Ni2+ as proteínas praticamente não se ligaram à resina. Em IMAC-Co2+, a PC não é adsorvida pela resina enquanto o FVIII pode ser eluído com imidazol 100 mM. Em IMAC-Cu2+ a PC eluiu com imidazol 10mM e o FVIII com 200mM. Não foi possível eluir as proteínas nem com NH4Cl 1M nem quando o pH foi abaixado até 4,0. Em IMAC-Zn2+ a PC não é adsorvida e o FVIII eluiu com imidazol 200mM ou NH4Cl 1M. Diminuindo-se o pH, a recuperação da atividade do FVIII foi baixa. Concluímos que IMAC-Co2+ apresentou os melhores rendimentos e melhores fatores de purificação para as 2 protéinas.
  • DOI: 10.11606/D.87.2012.tde-01062012-111458
  • Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Biotecnologia
  • Data de criação/publicação: 2012-03-19
  • Formato: Adobe PDF
  • Idioma: Português
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