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Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni

Marco, Ricardo De

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Química 2003-02-24

Acesso online. A biblioteca também possui exemplares impressos.

  • Título:
    Construção e caracterização de mini-bibliotecas de EST geradas com RT-PCR de baixa estringencia e clonagem de uma apirase de Schistosoma mansoni
  • Autor: Marco, Ricardo De
  • Orientador: Verjovski-Almeida, Sergio
  • Assuntos: Schistosoma Mansoni; Biologia Molecular; Bioquímica; Clonagem; Dados De Sequência Molecular; Schistosoma (Estudo); Schistosoma Mansoni; Schistosoma (Study); Molecular Sequence Data; Molecular Biology; Cloning; Biochemistry
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: Este trabalho demonstrou a construção de minibibliotecas de \"Expressed Sequence Tags\" (EST) com o uso de RT-PCR de baixa estringencia e \"primer\" consenso-degenerado. Através do estudo de parâmetros críticos como concentração de sais, temperatura e velocidade de ciclagem, composição dos \"primers\" e qualidade do RNA mensageiro, foi possível padronizar um protocolo. Tal protocolo permitiu um aumento do numero de seqüências por minibiblioteca em relação a protocolos similares existentes na literatura (Dias neto et al., 1997 e 2000) sem perda de características desejáveis como amplificação preferencial do centro dos genes e nomalização das mensagens. As seqüências produzidas levaram a um significativo aumento das seqüências de EST de S. mansoni disponíveis publicamente e permitiu a detecção da existência de novos fragmentos de genes expressos na fase adulta do parasita. Neste trabalho também clonamos uma apirase de S. mansoni cuja a seqüência não havia sido descrita anteriormente. O gene possui cerca de 2,7 mil pares de bases e codifica para uma proteína de 544 aminoácidos. Esta foi expressa em sistema heterologo e utilizada para obtenção de anticorpos policlonais contra esta proteína. Utilizando estes anticorpos foi possível detectar a proteína no tegumento do parasita.
  • DOI: 10.11606/T.46.2018.tde-10052018-143753
  • Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Química
  • Data de criação/publicação: 2003-02-24
  • Formato: Adobe PDF
  • Idioma: Português
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