Estudo da regulação transcricional da FtsH 1 de Arabidopsis thaliana

• Autor: Marcela Emanuele Scarso
• C S Fiori; Marcio de Castro Silva Filho; Simpósio Internacional de Iniciação Científica da Universidade de São Paulo (14. 2006 Ribeirão Preto, SP, Brasil
• Assuntos: HISTOQUÍMICA; PAPAVERALES
• É parte de: Ciências Biológicas e da Saúde; resumos São Paulo: USP, 2006
• Descrição: 1. Introdução e Objetivos: Compondo uma das maquinarias de degradação de proteínas em mitocôndrias e plastídeos, as metaloproteases AAA, tem despertado especial interesse da comunidade científica por desempenhar funções cruciais nestas organelas1. A protease FtsH é uma proteína integral de membrana e sua atividade proteolítica é dependente de zinco, tendo como principal função a degradação da proteína D1 do fotossistema II no contexto de reparo da fotoinibição .Estudos desenvolvidos no laboratório identificaram uma seqüência no promotor dogene da FtsH1 de Arabidopsis que poderia atuar como um regulador negativo daexpressão do gene. Com base nestas observações, o presente projeto tem buscado a caracterização da regulação transcricional deste gene, com o objetivo de identificar e compreender o mecanismo pela qual a FtsH1 de Arabidopsis tem sua expressão controlada. 2. Materiais e Métodos Para estudar a regulação transcricional do gene que codifica a FtsH1 de Arabidopsis, procedeu-se a realização de três diferentes construções gênicas representadas por deleções na região promotora do gene codificador da FtsH1, de forma a expressar o gene repórter GUSA (que codifica a enzima ß- glucuronidase). As construções gênicas foram amplificadas via Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e inseridas no vetor pCAMBIA 1301. Agrobactérias transformadas com as diferentes construções foram utilizadas na transformação de Arabidopsis pelo método "Floral Dip". As
  plantas transgênicas obtidas foram submetidas ao ensaio histoquímico de atividade da enzima ??-glucuronidase para visualização da expressão da FtsH1. 3. Resultados e Discussão: Ensaios histoquímicos preliminares foram realizados para análise da expressão do gene GUSA. Uma observação interessante foi o fato de haver um maior grau de expressão nas plantas transformadas com a construção referente à deleção de uma parte da região promotora (pCAMBIA 1301-Del-1). Uma avaliação mais detalhada da região regulatória presente no promotor do gene da FtsH1 revelou a presença de uma seqüência homóloga à um elemento regulador negativo conhecido como elemento S1F, inicialmente descrito em espinafre e conservado em muitas proteínas plastidiais. A remoção deste elemento regulador negativo putativo, permitiria uma maior expressão do gene repórter GUSA. As duas outras construções gênicas com fragmentos maiores do promotor fusionado ao gene repórter GUSA, quando expressas de forma estável em Arabidopsis, revelaram níveis significativamente menores de expressão. Estas observações sugerem que este gene é regulado negativamente em Arabidopsis. Evidências para este tipo de regulação podem ser suportadas por trabalhos que mostram que a FtsH1 controla o "turn over" da proteína D1 envolvida no processo de captação de luz nas membranas dos tilacóides. Esta proteína é inativada irreversivelmente em condições de alta luminosidade, o que requer a sua degradação e substituição por outras
  funcionalmente ativas. Os resultados observados neste trabalho ampliam significativamente os conhecimentos sobre a regulação da proteína FtsH1 e consequentemente, sobre a sua função nas plantas.4.Conclusão A seqüência homóloga ao elemento repressor S1F encontrada na região promotora provavelmente atua regulando negativamente a transcrição da FtsH1 de Arabidopsis thaliana.
  
• Editor: São Paulo USP
  
• Data de criação/publicação: 2006
  
• Formato: 1 CD-ROM col 4 3/4 in.
  
• Idioma: Português