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Identificação de fostoproteínas em células de uma linhagem de linforma do manto

Germano Aguiar Ferreira Lewis Joel Greene

2008

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Ferreira, Germano Aguiar )(Acessar)

  • Título:
    Identificação de fostoproteínas em células de uma linhagem de linforma do manto
  • Autor: Germano Aguiar Ferreira
  • Lewis Joel Greene
  • Assuntos: LINFOMA; CÉLULAS (IDENTIFICAÇÃO); ESPECTROMETRIA DE MASSAS; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: O estudo fosfoproteômico de células linfóides pode contribuir para a compreensão de sua origem através da elucidação das vias responsáveis pelo escape dessas do controle celular. A abordagem proteômica foi utilizada no estudo inicial da linhagem GRANTA-519, uma linhagem celular estabelecida de linfoma de células do manto, através da criação de um inventário inicial de identificação de proteínas com possíveis modificações pós-traducionais, especialmente fosforilações. Inicialmente as células de GRANTA-519 foram cultivadas em condições adequadas. Proteínas foram extraídas com tampão de lise contendo 7,7 M de uréia, 2,2 M de tiouréia, 4,4 % de CHAPS e uma mistura de cocktail inibidor de proteases. Após extração das proteínas do extrato celular, alíquotas de proteínas foram tratadas com 'lâmbda'PPase e submetidas a focalização isoelétrica em faixa de pH de 4,0 -7,0 e eletroforese em gel de poliacrilamida e SDS preparados em nosso laboratório. Proteínas foram detectadas através de coloração com coomassie coloidal G-250, coloração específica para fosfoproteínas e anticorpos específicos contra resíduos fosforilados de serina e tirosina. Mapas bidimensionais foram analisados utilizando o software ImageMaster Platinum. Vinte oito spots de um total de duzentos, cerca de'+ OU -' 14%, desapareceram após o tratamento com fosfatase alcalina. Proteínas modificadas pelo tratamento passaram por digestão in situ com tripsina e os peptídeos tripsínicos submetidos a espectrometria de
    massas em equipamentos do tipo MALDI- ToF e ESI triplo quádruplo. Doze proteínas dos spots digeridos, selecionados após o tratamento com 'lâmbda'PPase, foram identificados. As seguintes proteínas foram identificadas em mais de um spot alinhado horizontalmente: Nucleofosmina, uma proteína fosforilada envolvida com acetilação nucleolar e Anexina A6, uma proteína reguladora de cálcio extremamente conservada. Outras proteínas escolhidas após o tratamento com 'lâmbda'PPase foram identificadas como Heat shock 70 kDa protein 1, Stress-70 protein, mitochondrial, Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H, Tumor protein D52, Actin-related protein 2/3 complex subunit 5, Eukaryotic translation initiation factor 5A-1 e Rho GDP-dissociation inhibitor 1
  • Data de criação/publicação: 2008
  • Formato: 57 p. anexos.
  • Idioma: Português
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