Novas perspectivas no diagnóstico etiológico dos distúrbios do desenvolvimento sexual 46, XY

• Autor: Gomes, Nathália Lisboa Rosa Almeida
• Orientador: Mendonça, Berenice Bilharinho de
  
• Assuntos: Disgenesia Gonadal 46 Xy; Transtornos Do Desenvolvimento Sexual; Gene Dhx37; Gene Nr5a1; Sequenciamento De Nucleotídeos Em Larga Escala; Sequenciamento Completo Do Exoma; Dhx37 Gene; Nr5a1 Gene; High-Throughput Nucleotide Sequencing; Gonadal Dysgenesis 46 Xy; Disorders Of Sex Development; Whole Exome Sequencing
• Notas: Tese (Doutorado)
  
• Descrição: Os distúrbios do desenvolvimento sexual (DDS) 46,XY constituem um grupo de doenças com etiologia heterogênea, o que dificulta a análise molecular pela tradicional estratégia de estudo do gene candidato. O diagnóstico molecular é identificado em menos de 50% desses pacientes avaliados pelo sequenciamento por Sanger, especialmente aqueles com disgenesia gonadal (DG). As técnicas de sequenciamento paralelo em larga escala (SPLE), desenvolvidas nos últimos anos, permitem a análise simultânea de múltiplos genes, bem como a identificação de novos genes, como foi o caso do gene DEAH-box helicase 37 (DHX37). Este gene foi previamente identificado em nossa casuística como novo gene candidato à síndrome de regressão testicular embrionária (SRTE), considerada um espectro da DG. Neste contexto, os objetivos deste projeto foram: 1) determinar a etiologia molecular de uma coorte de pacientes com DDS 46,XY, identificando variantes em genes já associados à etiologia dos DDS e também em genes candidatos aos DDS; 2) identificar novos genes candidatos à etiologia dos DDS, utilizando SPLE por painel de genes-alvo e por sequenciamento exômico global, respectivamente. Para confecção do painel, foram incluídas as regiões exônicas de 63 genes já associados ou candidatos aos DDS na literatura, incluindo o DHX37. O sequenciamento foi realizado na plataforma Illumina. Os dados brutos foram analisados utilizando um pipeline para a identificação de variantes de ponto, indels e alteração de número de cópias. As variantes foram classificadas de acordo com os critérios do American College of Medical Genetics. A casuística estudada incluiu 100 casos esporádicos e 14 casos famílias de 7 famílias distintas, sendo 45 casos índices com DG (12 deles com SRTE), 54 casos classificados com DDS de etiologia indeterminada e 8 casos índices com DDS por provável defeito de síntese de andrógenos. Os casos esporádicos foram estudados por SPLE por painel, e os familiais foram estudados em sua maioria por sequenciamento exômico. O diagnóstico molecular foi elucidado em 20.5% dos pacientes, sendo identificadas variantes patogênicas ou possivelmente patogênicas em 6 dos 45 casos índices (13%) com DG, 10 dos 54 índices (18.5%) com DDS de etiologia indeterminada e em 6 dos 8 casos índices (75%) com DDS com suspeita diagnóstica, incluindo variantes no NR5A1, DHX37, WT1, AMH, MAP3K1, SRD5A2 E HSD17B3. Variantes de significado incerto foram identificadas em 12% da casuística, destacando-se as variantes no GATA4, MAP3K1, ESR2, CBX2.2. Em 5% dos pacientes foram identificadas duas variantes, sugerindo herança digênica. As variantes no DXH37 (n=4) foram as mais frequentes sendo identificadas em quatro casos esporádicos e em três casos familiais de duas famílias distintas com fenótipos variados, de SRTE a DG parcial, a maioria deles sem derivados Mullerianos. As variantes estão localizadas em dois domínios conservados da proteína (helicase C-terminal e de ligação ao ATP) e sua frequência foi significativamente superior em pacientes com fenótipo de SRTE (44%) e DG (8%) em relação aos controles (p < 0.001). Os achados desse trabalho reforçam a relevância do SPLE na determinação etiológica dos DDS 46,XY e indicam que variantes no DHX37 são causa frequente de DDS disgenético, em todo o seu espectro, especialmente de SRTE, sendo este gene importante não só na formação como na manutenção testicular
  
• DOI: 10.11606/T.5.2020.tde-09012020-160107
  
• Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Faculdade de Medicina
  
• Data de criação/publicação: 2019-10-11
  
• Formato: Adobe PDF
  
• Idioma: Português