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Caracterizacao molecular do gene da delta-endotoxina sua clonagem e transformacao em bacillus thuringiensis berliner

Olivia Marcia Nagy Arantes João Lúcio de Azevedo

1989

Localização: ESALQ - Biblioteca Central    (ARANTES, O.M.N. )(Acessar)

  • Título:
    Caracterizacao molecular do gene da delta-endotoxina sua clonagem e transformacao em bacillus thuringiensis berliner
  • Autor: Olivia Marcia Nagy Arantes
  • João Lúcio de Azevedo
  • Assuntos: CLONAGEM; GENES; LEPIDOPTERA
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: A partir de um novo isolado de Bacillus thuringiensis, SPL407(serotipo hl), detectou-se o gene 'delta'-endotoxina, usando DNA total. Este gene foi inserido em dois vetores. A princípio no pUC18, originando o plasmídio pHT407, e depois no pH3101, um novo vetor, originando o pHT408. O pHT409 e o pHT410 são pHT408 deletado de 5 kb na região vizinha ao gene cry clonado em orientações diferentes em relação ao promotor lac Z do pUC18 (pHT409, orientação oposta e pHT410 a mesma orientação). Os quatro novos plasmídios foram introduzidos em E. coli transformação clássica e em B. thuringiensis var kurstakiHD1Cry'ANTPOT. -B' por eletroporação. A expressão do gene cry ocorreu nas duas espécies. No início da fase estacionária de B. thuringiensis, onde normalmente a bactéria não produz 'beta'-endotoxina, o clone pHT410 sintetiza este polipeptídeo, provavelmente devido a diferenças no comportamento do promotor lac. Através do Western blotting e imunodetecção verificou-se que o gene clonado do tipo cryIAa produz um polipeptídio de 130 kDa, que se expressa fracamente na linhagem parental (SPL407), que por sua vez produz um polipeptídio de 140 kDa, mostrando que nesta linhagem coexistem, no mínimo, dois genes da 'delta'-endotoxina ativa sobre Lepidoptera que se expressam diversamente
  • Data de criação/publicação: 1989
  • Formato: 124p.
  • Idioma: Português
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