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Extração da pró-toxina épsilon e de uma protease a partir de Clostridium perfringens em sistemas de duas fases aquosas utilizando PEG/Citrato

Tatiana Souza Porto Adalberto Pessoa Junior

2004

Localização: CQ - Conjunto das Químicas    (T 620.8 P853e )(Acessar)

  • Título:
    Extração da pró-toxina épsilon e de uma protease a partir de Clostridium perfringens em sistemas de duas fases aquosas utilizando PEG/Citrato
  • Autor: Tatiana Souza Porto
  • Adalberto Pessoa Junior
  • Assuntos: BIOTECNOLOGIA; MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL; ENZIMOLOGIA (APLICAÇÕES INDUSTRIAIS)
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: Este trabalho tem como finalidade obter condições de recuperar e purificar a pró-toxina épsilon e uma protease produzida pelo Clostridium perfringens através do uso da técnica de extração líquido-líquido em sistema de duas fases aquosas (SDFA) para utilização na produção de vacinas. A aplicação do sistema de duas fases aquosas é proposta como alternativa para a purificação, pois permite a separação e análise de partículas biológicas. Esta técnica é aconselhável para purificação em larga escala pela possibilidade de partição seletiva com altos rendimentos, além de apresentar uma boa relação custo-benefício. Foram construídas as curvas binodais que foram utilizadas para análise da composição dos sistemas de duas fases aquosas formados por polietileno glicol e citrato de sódio, como também a extração e recuperação da pró-toxina épsilon e da protease produzidas por Clostridium perfringens. As curvas binodais foram construídas utilizando PEG 400, 550, 1000, 1500, 3350 e 8000 em diferentes valores de pH (6,0; 6,5; 7,0; 7,5 e 8,0) e água para formação do sistema. Também foram construídas curvas na presença de caldo clarificado em substituição à água. Foi avaliada ainda a estabilidade da pró-toxina épsilon, antes da extração, e da protease antes e após a extração, frente às variações de pH e temperatura. Um planejamento experimental (´2POT.8-3`) foi usado para avaliar a influência das variáveis concentração e massa molar do PEG, concentração de citrato, pH, concentração
    de NaCl, fator de diluição do extrato, temperatura e massa total do sistema na extração da pró-toxina épsilon. A partição de uma protease presente no meio fermentado de C. perfringens foi estudada através do uso de três planejamentos experimentais completos (dois do tipo ´2POT.4` e um do tipo ´2POT.3`) que avaliaram a influência das variáveis concentração e massa molar do PEG, concentração de citrato e pH. Três variáveis-resposta foram obtidas ) (aumento de pureza, coeficiente de partição e recuperação da enzima). Os resultados atingidos foram: coeficiente de partição de 0,57, aumento de pureza de 4,2 com uma recuperação de 131 ´POR CENTO` da atividade enzimática na fase superior do sistema. O sistema de extração que proporcionou as melhores condições de extração foi constituído por: PEG 10000 (g/mol) e concentração de 22 ´POR CENTO` (m/m), concentração de citrato de 8 ´POR CENTO` (m/m) e pH 8,5. A protease permaneceu estável (durante 48 h), mesmo após a extração, nas temperaturas 5'GRAUS CENTIGRADOS`e 25´GRAUS CENTIGRADOS`e nos valores de pH de 6,0 a 9,0.
  • Data de criação/publicação: 2004
  • Formato: 87 p.
  • Idioma: Português
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