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Desenvolvimento de uma metodologia de PCR semiquantitativa utilizando plasmídio clonado com parte do gene gB de citomegalovírus

Lauro J. Marin Aldo A Cunha; Victor Hugo Aquino; Luiz Tadeu Moraes Figueiredo

Medicina Ribeirão Preto v. 35, p. 85-94, 2002

Ribeirão Preto 2002

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (pcd 1327822 )(Acessar)

  • Título:
    Desenvolvimento de uma metodologia de PCR semiquantitativa utilizando plasmídio clonado com parte do gene gB de citomegalovírus
  • Autor: Lauro J. Marin
  • Aldo A Cunha; Victor Hugo Aquino; Luiz Tadeu Moraes Figueiredo
  • Assuntos: INFECÇÕES POR CYTOMEGALOVIRUS; CARGA VIRAL; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
  • É parte de: Medicina Ribeirão Preto v. 35, p. 85-94, 2002
  • Descrição: A infecção por citomegalovírus é disseminada em nosso meio e costuma acometer, com significante morbimortalidade, indivíduos imunodeprimidos, especialmente, transplantados de medula óssea e de rim bem como pacientes com AIDS. Neste trabalho, descrevemos o desenvolvimento de uma PCR semiquantitativa para detectar e quantificar cargas de CMV, presentes em materiais clínicos. Para tanto, inserimos em plasmídios PCR II (Invitrogen, USA), o fragmento com 296 pares-base do gene da glicoproteína B do CMV. Os plasmídios com inserto foram transfectados em Escherichia coli, multiplicados, verificados quanto à presença do inserto por seqüenciamento nucleotídioo, purificados, e quantificados. Os plasmídios com inserto foram titulados em diluições decimais e as mesmas foram submetidas à PCR descrita anteriormente, que foi, também, utilizada nos testes semiquantitativos, permitindo determinar a sensibilidade da técnica, 867 cópias de CMV / mg de DNA. Com base nas densidades das bandas eletroforéticas dos amplicons de amostras clínicas, comparadas às da titulação de plasmídios contendo inserto de glicoproteína B do CMV, obtivemos as cargas virais. A técnica de PCR semiquantitativa, por nós padronizada, tem, como vantagens, o baixo custo e o fácil manuseio após sua padronização, podendo ser testada na detecção da carga de CMV em diferentes tipos de pacientes com suspeita de citomegalovirose
  • Editor: Ribeirão Preto
  • Data de criação/publicação: 2002
  • Formato: p. 85-94.
  • Idioma: Português
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