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Isolamento de mutantes deficientes na reposta a estresse osmótico em Caulobacter crescentus

Marilis do Valle Marques Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV (2002 São Paulo)

Resumos São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002

São Paulo Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP 2002

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  • Título:
    Isolamento de mutantes deficientes na reposta a estresse osmótico em Caulobacter crescentus
  • Autor: Marilis do Valle Marques
  • Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV (2002 São Paulo)
  • Assuntos: MICROBIOLOGIA
  • É parte de: Resumos São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002
  • Descrição: Caulobacter crescentus é uma bactéria Gram-negativa, não patogênica, encontrada em praticamente todos os ambientes aquáticos e em muitos tipos de solo. Estes ambientes são pobres em nutrientes e com pH próximo da neutralidade. Esta bactéria é atualmente um dos principais modelos para estudos de diferenciação celular em procariotos. O objetivo deste trabalho é identificar genes envolvidos na resposta a alta concentração de sal (NaCl) e outros tipos de estresses osmóticos. Uma biblioteca foi construída pela inserção do transposon Tn5 e os clones foram selecionados em meio (PYE) com 5 mg/ml de canamicina e 0,5% NaCl. Isolamos deste modo seis mutantes incapazes de crescerem nestas condições. Utilizando a técnica de seqüenciamento do DNA, nós determinamos o sítio de inserção do Tn5 para todos os mutantes, permitindo desta forma a identificação dos genes interrompidos. Em seguida, realizamos estudos com as regiões promotoras. Por meio de PCR, amplificamos os fragmentos correspondentes às regiões promotoras de cada mutante e após digestão e ligação ao vetor pRKlacZ290, os plasmídeos foram introduzidos em Caulobacter Uma vez obtidos estes sistemas repórteres, analisamos o padrão de expressão dos genes a partir de ensaios de imunoprecipitação da b-galactosidase, sob duas condições diferentes: exposição ao NaCl e sacarose. Observamos que apenas um dos promotores mostrou indução em ambas as situações e um dos promotores mostrou indução apenas pelo sal, nos
    demais não foi observada nenhuma indução. Iniciamos os estudos de eletroforese bi-dimensional dos mutantes por meio de comparações dos diferentes padrões de expressão gênica entre a linhagem selvagem NA1000 e um dos mutantes, quando submetidos a situações de estresse osmótico, analisando desta maneira quais proteínas se encontram alteradas
  • Editor: São Paulo Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
  • Data de criação/publicação: 2002
  • Formato: 1. (várias paginações) poster 199.; Disponível em CD-ROM.
  • Idioma: Português
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