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Expressão genética diferencial e apoptose induzidas pela radiação ionizante em fibroblastos de camundongos BALB/3T3 transfectados com o oncogene HA-RAS

Paulo Peitl Júnior Elza Tiemi Sakamoto-Hojo

2001

Disponible en FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto (Peitl Júnior, Paulo )(Obténgalo)

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Título:
Expressão genética diferencial e apoptose induzidas pela radiação ionizante em fibroblastos de camundongos BALB/3T3 transfectados com o oncogene HA-RAS
Autor: Paulo Peitl Júnior
Elza Tiemi Sakamoto-Hojo
Materias: APOPTOSE (GENÉTICA); EXPRESSÃO GÊNICA
Notas: Tese (Doutorado)
Descripción: As radiações ionizantes podem induzir lesões no DNA que acionam vários mecanismos de defesa envolvendo complexos processos metabólicos e de transdução de sinais. A resposta biológica envolve alterações na expressão de muitos genes, como proto-oncogenes, genes que controlam o ciclo celular assim como o processo de apoptose. Há evidências na literatura que correlacionam a expressão do oncogene ras com a inibição de apoptose. O objetivo do presente trabalho foi estudar os efeitos de vários níveis de exposição às radiações gama sobre a expressão do oncogene ras paralelamente à detecção de células apoptóticas, em fibroblastos de camundongos. Foram realizados experimentos 'in vitro' com as linhagens de células normais (Clone A31 ) e B61 (linhagem celular originada da transfecção de células A31 com o oncogene Ha-ras). Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas na expressão do gene ras em células B61 submetidas a diferentes doses de radiação e coletadas em diferentes tempos após a exposição, embora tenham sido detectados pequenos picos de indução (18h e 30h) e de repressão (3h e 6h). A incidência de morte celular (apoptose) foi analisada em células A31 e B61 por citometria de fluxo, empregando-se a técnica de coloração pela anexina V. A linhagem B61 mostrou decréscimos estatisticamente significantes na freqüência de células apoptóticas após as doses de 1 e 3 Gy quando coletadas 18 horas após a irradiação. A freqüência basal de apoptose para a
linhagem A31 foi mais elevada que a observada para a linhagem B61, confirmando o papel do oncogene ras na inibição do processo apoptótico. Um outro objetivo do trabalho foi o estudo de expressão gênica e apoptose, por meio de experimentos 'in vivo' realizados em camundongos inoculados com as células A31 e B61, visando à comparação da radiossensibilidade de diferentes tecidos (tumor, fígado e baço). As análises de expressão gênica induzidas pelas radiações ) gama foram realizadas em três experimentos, sendo que os resultados da expressão do mRNA ras avaliados por "Northern" e por "dot blot" demonstraram um aumento somente nos animais irradiados com a dose de 6 Gy e sacrificados 1 hora após a irradiação. A expressão do gene ras não foi detectada no fígado e no baço dos camundongos irradiados, nos tempos estudados. Com relação à análise de células apoptóticas por imunohistoquímica em amostras de tumores de animais irradiados, foi verificado um aumento na freqüência de apoptose de maneira dependente da dose, mas não do tempo de coleta após a exposição. Com a finalidade de comparar ambas as linhagens quanto aos níveis de expressão gênica, foi empregada a metodologia de DNA "macroarrays" com sondas complexas preparadas a partir de mRNA de células A31 a B61. Foi também realizada a comparação com os resultados obtidos para o tumor induzido experimentalmente pelas células B61 inoculadas em camundongos. Foi avaliada a expressão de 3072 genes, sendo observados 37 genes
que se expressaram diferencialmente entre ambas linhagens. As células B61 expressaram diferentes genes, incluindo alguns participantes da regulação do ciclo celular e transdução de sinais. A comparação entre a expressão gênica apresentada pela linhagem B61 e pelo tecido tumoral induzido revelou 75 genes diferencialmente expressos, além de 328 ESTs, que representam importantes alvos para estudos futuros. As informações obtidas são valiosas no sentido de direcionar as investigações para o esclarecimento das interações entre os vários grupos de genes que controlam diferentes processos celulares
Fecha de creación: 2001
Formato: 103 p anexos.
Idioma: Portugués

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Expressão genética diferencial e apoptose induzidas pela radiação ionizante em fibroblastos de camundongos BALB/3T3 transfectados com o oncogene HA-RAS

Paulo Peitl Júnior Elza Tiemi Sakamoto-Hojo

2001

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