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Irradiação ultravioleta de cromossomos metafásicos de oócitos suínos degradação de MPF ("maturation promoting factor") quinase, citologia nuclear e progressão do ciclo celular

Cláudia Lima Verde Leal Enoch Borges de Oliveira Filho

1997

Localização: FMVZ - Fac. Med. Vet. e Zootecnia    (T.618 FMVZ e.2 )(Acessar)

  • Título:
    Irradiação ultravioleta de cromossomos metafásicos de oócitos suínos degradação de MPF ("maturation promoting factor") quinase, citologia nuclear e progressão do ciclo celular
  • Autor: Cláudia Lima Verde Leal
  • Enoch Borges de Oliveira Filho
  • Assuntos: SUÍNOS; CITOLOGIA ANIMAL; OÓCITOS; ANÁLISE MORFOLÓGICA; ENUCLEAÇÃO ANIMAL
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da irradiação focal de cromossomos metafásicos de oócitos suínos com luz ultravioleta (UV), utilizada como método não invasivo de enucleação funcional de oócitos, sobre a capacidade de ativação partenogenética dos mesmos. O protocolo experimental envolveu a irradiação da placa metafásica de oócitos suínos com luz ultravioleta (UV) de 254nm altamente focalizada, seguida por ativação seguindo procedimentos padrão de eletroativação. Foram avaliados dois grupos de oócitos: controle, submetido somente à ativação elétrica (A) e tratado, submetido à irradiação UV, seguida de ativação elétrica (UV+A). Em ambos os grupos foram avaliadas: (i) reorganização da membrana nuclear, (ii) citologia cromossômica, (iii) alterações de atividade de MPF (Maturation Promoting Factor) quinase em intervalos de uma hora até 8 após a ativação e (iv) retomada dos ciclos mitóticos pelos oócitos. Os parâmetros (i) e (ii) foram avaliados às 8 horas e o (iv) às 24, 48 e 72 horas após a ativação. Quanto à reorganização das membranas nucleares, não houve diferença entre os 2 grupos estudados (64,4%-67,4%) indicando a manutenção da capacidade para formar pronúcleos, nos oócitos irradiados. A irradiação UV induziu um aumento significativo (P<0,05) de defeitos de cromatina (53,5% vs 6,6%), incluindo condensação e dispersão de fragmentos de DNA, o que por sua vez resultou na formação de micronúcleos nos oócitos e embriões tratados. O padrão
    de inativação de MPF quinase exibiu comportamento semelhante nos dois grupos ao longo de todos os tempos avaliados, tendo sido observada diferença significativa (P<0,05) somente entre o tempo 0h (imediatamente antes da ativação) e todos os outros tempos após a ativação (de 0,5 até 8 horas) em ambos os grupos, denotando que a irradiação UV não afetou o padrão normal de degradação de MPF quinase após ativação do oócito. A presença de DNA danificado ) retardou o prosseguimento do primeiro ciclo mitótico, com ausência de clivagem nas primeiras 24 horas após a ativação do grupo irradiado (0 vs 41,2%). As clivagens posteriores não foram inibidas, com taxas de clivagem às 48 e 72 horas semelhantes para os dois grupos (33,3%-50%). Nenhuma evidência foi obtida de que o ciclo celular subsequente tivesse sido afetado adversamente pela presença de DNA inativado por UV. Nossos resultados mostram que a irradiação cromossômica não afeta adversamente a ativação de oócitos suínos, em termos de reorganização de membranas nucleares e de inativação de MPF quinase, mas oferece evidências de que DNA danificado retarda, mas não bloqueia o primeiro ciclo mitótico. O uso de irradiação UV focal, oferece possibilidades como uma técnica simples e rápida para enucleação não-invasiva de oócitos mamíferos para transplante de núcleo, no entanto, experimentos visando avaliar a capacidade dos oócitos enucleados em processar núcleos transplantados, são necessários para validar a adequação da técnica
  • Data de criação/publicação: 1997
  • Formato: 63 p.
  • Idioma: Português
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