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Análise funcional de genes de Aspergillus fumigatus regulados pelo fator de transcrição CrzA

Patrícia Alves de Castro Silva Gustavo Henrique Goldman

2016

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Silva, Patricia Alves de Castro )(Acessar)

  • Título:
    Análise funcional de genes de Aspergillus fumigatus regulados pelo fator de transcrição CrzA
  • Autor: Patrícia Alves de Castro Silva
  • Gustavo Henrique Goldman
  • Assuntos: ASPERGILLUS; CÁLCIO; METABOLISMO; VIRULÊNCIA
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: Aspergillus fumigatus é um importante patógeno oportunista e alérgeno de mamíferos. A sinalização de cálcio é essencial para a patogênese deste fungo e é regulada pelo fator de transcrição CrzA. Neste estudo, foi utilizado ChIP-seq (Chromatin Immunoprecipitation DNA sequencing) para explorar os genes alvos de CrzA em A. fumigatus. No total, foram identificados 165 potenciais picos de ligação, incluindo 102 genes diretamente regulados, o que resultou na predição do motivo de ligação A[GT][CG]CA[AC][AG] do CrzA. Os 102 genes putativamente regulados pelo CrzA exibiram um conjunto diversificado de funções. Dentre eles, os genes phkB (Afu3g12530), uma histidina quinase e sskB (Afu1g10940), uma MAPKKK da via metabólica de estresse osmótico HOG. Vários membros do sistema de dois componentes (TCS) e da via HOG foram mais sensíveis ao cálcio. CrzA::GFP foi translocado para o núcleo durante estresse osmótico, e esta translocação foi dependente de calcineurina. Além disso, CrzA foi importante para a fosforilação de SakA MAPK em resposta ao choque osmótico. A linhagem ΔsskB foi mais sensível ao CaCl2, a NaCl, ao paraquat e apresentou virulência atenuada no modelo de aspergilose invasiva em camundongos. A presença de CaCl2 e estresse osmótico resultou em uma inibição sinergística do crescimento de ΔcrzA e ΔsskB. Assim, estes resultados sugerem a existência de uma interação genética entre as vias calcineurina-CrzA e HOG em A. fumigatus, a qual é essencial para a virulência. Outro gene alvo identificado neste screening foi o homólogo de Sch9, nomeado SchA, uma Ser/Thr quinase de família AGC (the cAMPdependent PKA, cGMP- dependent protein kinase G and phospholipid-dependent protein kinase C family) e também substrato da proteína quinase TOR (“Target of Rapamycin”). O mutante nulo ΔschA foi sensível a rapamicina, a altas concentraçães de cálcio, ao estresse osmótico e apresentou envolvimento no metabolismo
    de ferro. As análises de transcriptoma e proteômica identificaram alvos diretos e indiretos de SchA pós-exposição a estresse osmótico. O mutante schA nulo apresentou uma fosforilação aumentada de SakA e virulência atenuada no modelo de infecção murina. Assim, estes dados indicam uma complexa rede de interações entre as vias metabólicas de TOR, SakA e SchA. Finalmente, foi identificada uma nova família de proteínas relacionada ao metabolismo de cálcio e virulência em A. fumigatus. O putativo transportador de flavina, flcA, é regulado pelo CrzA sob estresse com cálcio e pertence a uma pequena família de proteínas composta por FlcA, B e C. O mutante nulo ΔflcA exibiu vários fenótipos, assim como defeitos morfológicos, aumento da sensibilidade a cálcio e ciclosporina, agentes de dano à parede celular, estresse oxidativo e metais, o que é representativo de deficiências na sinalização de cálcio e homeostase de ferro. Contudo, o crescimento de ΔflcA foi melhorado na presença de altas concentrações de cálcio. Estes diferentes fenótipos sugerem que FlcA possa ter envolvimento no transporte de cálcio. Além disso, os mutantes ΔflcA-C mostraram reduzido flavin adenine dinucleotide (FAD) e foram avirulentos no modelo de infecção em camundongos neutropênicos
  • Data de criação/publicação: 2016
  • Formato: 156 p anexos.
  • Idioma: Português
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