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Caracterização de dois genes de Caulobacter crescentus importantes para a sobrevivência em baixa temperatura

R. R. Mazzon E. A. S Lang; V. S Braz; Marilis do Valle Marques; Congresso Brasileiro de Genética (53. 2007 Águas de Lindóia, Brasil)

Resumos Águas de Lindóia: Sociedade Brasileira de Genética, 2007

Águas de Lindóia Sociedade Brasileira de Genética 2007

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  • Título:
    Caracterização de dois genes de Caulobacter crescentus importantes para a sobrevivência em baixa temperatura
  • Autor: R. R. Mazzon
  • E. A. S Lang; V. S Braz; Marilis do Valle Marques; Congresso Brasileiro de Genética (53. 2007 Águas de Lindóia, Brasil)
  • Assuntos: MICROBIOLOGIA
  • É parte de: Resumos Águas de Lindóia: Sociedade Brasileira de Genética, 2007
  • Descrição: Dentre os fatores ambientais mais críticos para a sobrevivência e crescimento das bactérias está a temperatura, que exige adaptações rápidas. O estudo da resposta e adaptação ao choque frio é importante para o entendimento de como os organismos sobrevivem a estresses de baixas temperaturas. Caulobacter crescentus é uma bactéria oligotrófica, gram-negativa, que está com o seu genoma totalmente seqüenciado, e possui grande resistência ao frio e congelamento. Este trabalho tem por objetivo a caracterização de alguns genes de Caulobacter crescentus importantes para a sobrevivência em baixa temperatura. Uma biblioteca de 5700 mutantes, construída através da inserção do transposon miniTn5lacZ carregado por um plasmídeo suicida foi varrida para o isolamento de mutantes sensíveis a congelamento. Cinco mutantes foram inicialmente selecionados e os dois mais sensíveis tiveram o DNA genômico extraído, digerido com a enzima PstI, e os fragmentos clonados no vetor pUCBM20. Os clones resistentes a canamicina foram seqüenciados, permitindo a identificação dos genes interrompidos. Os genes foram o CC0835, que codifica para uma RNA helicase dependente de ATP da família DEAD/DEAH box, e CC2267, que codifica para uma proteína hipotética. Estes mutantes tiveram seus fenótipos caracterizados através de curvas de crescimento a 5ºC, 15ºC e 30ºC e curvas de viabilidade antes e após congelamento a -20ºC e -70ºC. O congelamento a -20ºC mostrou-se mais prejudicial para os
    mutantes e para a linhagem parental (NA1000) que a -70ºC. Apenas o mutante do gene CC0835 apresentou retardo de crescimento a 15ºC, tendo crescimento similar a NA1000 nas outras condições. A análise do padrão de expressão destes genes sob baixa temperatura foi realizada através de experimentos de RT-PCR quantitativo (tempo real). ) Foi construído um mutante nulo do gene CC2267 obtido por dupla recombinação homóloga para confirmação do fenótipo. Uma cópia do gene controlado por promotor regulado foi obtida para experimentos de complementação e superexpressão deste gene.
  • Editor: Águas de Lindóia Sociedade Brasileira de Genética
  • Data de criação/publicação: 2007
  • Formato: p. 78.
  • Idioma: Português
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