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Expressão, purificação e caracterização do Leishmania RNA Virus 1-4 e da proteína U5-15k do Tripanosoma brucei

Souza, Marcos Michel De

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Física de São Carlos 2012-09-17

Acesso online. A biblioteca também possui exemplares impressos.

  • Título:
    Expressão, purificação e caracterização do Leishmania RNA Virus 1-4 e da proteína U5-15k do Tripanosoma brucei
  • Autor: Souza, Marcos Michel De
  • Orientador: Thiemann, Otavio Henrique
  • Assuntos: Leishmania Rna Vírus 1-4; Expressão De Proteínas; U5-15k Tripanosoma Brucei; Leishmania Rna Virus 1-4; Protein Expression
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: O estudo dos protozoários é importante por diversos motivos, entre eles sua diversidade, sua importância evolucionária e impacto na saúde pública. Muitos aspectos tornam o estudo desses seres vivo ainda mais fascinantes, como por exemplo, fenômenos como o trans-splincing e a presença de um vírus em algumas espécies de leishmanias. A proteína U5-15k é considerada de grande importância fazendo parte do spliciossoma. Neste trabalho tivemos o objetivo de iniciar a caracterização desta proteína empregando ferramentas de bioinformática para analisar sua sequencia de aminoácidos, sua estrutura secundária e modelar sua estrutura por homologia, também foi possível otimizar sua expressão, purificação, caracterizar sua auto clivagem e fazer estudos biofísicos de Espalhamento Dinâmico de Luz e Espectroscopia de Dicroísmo Circular. O Leishmania RNA vírus 1-4 (LRV1-4) é um vírus da família Totiviridae de capsídeo icosaédrico que codifica duas proteínas (proteína capsidial e RNA polimerase). Sendo pouco estudado tivemos o objetivo de iniciar a caracterização molecular deste vírus com objetivos futuros de empreender estudos estruturais e funcionais. Não foi possível obter expressão recombinante em nenhuma das duas proteínas virais, por isso se optou por se estabelecer um novo protocolo de lise celular e purificação com o qual se obteve imagens inéditas de Microscopia Eletrônica de Varredura, na qual o vírus é purificado ainda envolto em material genético.
  • DOI: 10.11606/T.76.2012.tde-05102012-112826
  • Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Física de São Carlos
  • Data de criação/publicação: 2012-09-17
  • Formato: Adobe PDF
  • Idioma: Português
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