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Identificação e caracterização parcial de fração ligante de quitina da preparação paracoccina de Paracoccidioides brasiliensis

Ana Claudia Paiva Alegre Ebert Seixas Hanna

2010

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Alegre, Ana Claudia Paiva )(Acessar)

  • Título:
    Identificação e caracterização parcial de fração ligante de quitina da preparação paracoccina de Paracoccidioides brasiliensis
  • Autor: Ana Claudia Paiva Alegre
  • Ebert Seixas Hanna
  • Assuntos: PARACOCCIDIOIDES BRASILIENSIS; IMUNOLOGIA; MICROBIOLOGIA
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da micose granulomatosa crónica mais prevalente na América do Sul, com alta incidência no Brasil. O Racionamento do extraio bruto de P. brasiliensis, chamado de preparação paracoccina, foi isolado por afinidades a N-acetilglicosamina e quitina. A preparação paracoccina possui componente(s) que contribui(em) para a adesão do fungo a matriz extracelular, e induz macrófagos a produzirem TNF-‘alfa’ e altas concentrações de NO. A partir da tecnologia IgY, descrita neste trabalho, tornou-se possível a produção de grandes quantidades de anticorpos policlonais contra a preparação paracoccina (PCN-prep), que viabilizaram os ensaios de rastreamento da biblioteca de cDNA de leveduras de P. brasiliensis. Alguns genes identificados continham sequência de tradução de proteínas já descritas para o isolado Pbl 8, como o gene PADG_02130.1, correspondente a uma ciclohidrolase. Um dado importante foi a aplicação de técnicas de proteômica para identificar componentes da preparação paracoccina, que destacou o gene que codifica uma proteína hipotética de P. brasiliensis, anotado como PADG_03347. A proteína resultante desse gene apresenta sequência polipeptídica com alta homologia a proteínas compostas por domínios plurais distintos, sendo um ligante de quitina e outro com atividade quitinolítica. O maior éxon do gene PADG_03347 foi clonado em sistema bacteriano para a expressão de molécula recombinante, que corresponde a mais de 80% da sequência polipeptídica predita para a molécula nativa. O fragmento recombinante foi reconhecido pelos anticorpos IgY anti-PCN-prep, reforçando a ideia de que a proteína expressa por PADG_03347 deve estar presente na PCN-prep. Adicionalmente, anticorpos presentes no soro de pacientes com paracoccidioidomicose, que reagiram fortemente com diversas Rações em PCN-prep, reagiram também com a fraçao
    recombinante. Esse fragmento recombinante foi caracterizado por possuir certa atividade de N-acetil-‘beta’-D-glicosaminidase, menor quando na comparação com o material purificado em coluna de quitina. Por outro lado, a atividade lectínica parece preservada na molécula recombinante, e essa atividade pode estar relacionada com a capacidade de induzir as produções de NO e TNF-alfa por macrófagos peritoneais, confirmadas nesse trabalho. Assim, os estudos de caracterização da molécula recombinante trouxeram informações importantes que devem guiar estudos futuros mais abrangentes com essa molécula
  • Data de criação/publicação: 2010
  • Formato: 109 p.
  • Idioma: Português
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