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Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus

C. A P. T. Silva H Balhesteros; E. A. S Lang; V. C. S Italiani; Marilis do Valle Marques; Congresso Brasileiro de Genética (54. 2008 Salvador, Brasil)

Programa Ribeirão Preto, 2008

Ribeirão Preto Sociedade Brasileira de Genética 2008

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  • Título:
    Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus
  • Autor: C. A P. T. Silva
  • H Balhesteros; E. A. S Lang; V. C. S Italiani; Marilis do Valle Marques; Congresso Brasileiro de Genética (54. 2008 Salvador, Brasil)
  • Assuntos: MICROBIOLOGIA
  • É parte de: Programa Ribeirão Preto, 2008
  • Descrição: Caulobacter crescentus é uma bactéria mesófila, gram-negativa, encontrada em amostras de água de lagos que congelam por completo no inverno. C. crescentus possui quatro genes de choque frio: cspA e cspB são induzidos em resposta ao choque frio e cspC e cspD são induzidos em fase estacionária. O objetivo deste trabalho é a identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de C. crescentus. Inicialmente foi realizada a varredura de uma biblioteca de 7.500 clones mutados pela inserção do transposon Tn5. Os clones mutantes da biblioteca receberam o plasmídeo PcspD/lacZ (promotor de cspD clonado à frente do gene repórter lacZ no plasmídeo pRKlacZ290) por conjugação com E.coli S17-1. Através de avaliação utilizando X-Gal e posteriormente ensaio de atividade de ?-galactosidase, foram selecionadas 6 linhagens mutantes que apresentaram baixa atividade enzimática em comparação ao controle positivo (linhagem NA1000 de C. crescentus conjugada com o plasmídeo PcspD/lacZ).Através de seqüenciamento de DNA, foram identificados os genes interrompidos em 5 mutantes: CC0254 (proteína transportadora de membrana); CC2587 (ABC Transporter); CC2518 (proteína hipotética); CC3167 (proteína da família glicoquinase) e CC3504 (proteína da família peptidase M13). A expressão de cspD no mutante CC3167 foi avaliada em meio M2 (meio mínimo) e em M2 com carência de carbono na fase exponencial e fase estacionária mostrando um aumento de expressão em
    carência de glicose. Também foi realizada uma curva de crescimento do mutante CC3167 nos meios PYE e M2 onde foi visto um crescimento bem mais lento no meio M2. A expressão de cspD de C. crescentus também foi avaliada em resposta a carência nutricional de carbono e amônia, em presença de diferentes compostos. ) Notou-se um aumento significativo em torno de 50% da indução do gene cspD nas células crescidas em meio mínimo com carência de carbono e amônia o que demonstra que carência nutricional também é um fator que altera a expressão deste gene. No ensaio de crescimento em diferentes meios a expressão de cspD aumentou expressivamente na fase estacionária em meio M2 contendo 2% peptona, o que nos leva a pensar que a expressão deste gene pode ser afetada pela a via de regulação por ppGpp. A partir disto realizamos ensaios de atividade de ?-galactosidase preliminares na presença de metil-alfa-D-glicosídeo (simulando carência de glicose) e DL-serina hidroxamato (simulando carência de aminoácidos)e foi verificado um aumento de duas vezes na expressão de cspD nas duas condições. A proteína CspD recombinante foi expressa em em E.coli e purificada para obtenção de soro anti-CspD.
  • Editor: Ribeirão Preto Sociedade Brasileira de Genética
  • Data de criação/publicação: 2008
  • Formato: p. 90.
  • Idioma: Português
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