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Expressão da via de sinalização RAX- PKR- eIF-2 'alfa'-ATF4 e micro-RNAs na retinopatia diabética experimental

Viviane Aline Oliveira Silva Fernando Luiz De Lucca

2009

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Silva, Viviane Aline Oliveira )(Acessar)

  • Título:
    Expressão da via de sinalização RAX- PKR- eIF-2 'alfa'-ATF4 e micro-RNAs na retinopatia diabética experimental
  • Autor: Viviane Aline Oliveira Silva
  • Fernando Luiz De Lucca
  • Assuntos: DOENÇAS RETINIANAS; DEGENERAÇÃO NEURAL; DIABETES MELLITUS
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: A retinopatia diabética (RD) é uma das complicações mais freqüentes de diabetes mellitus. Estudos recentes mostraram que a apoptose de neurônios da retina desempenha um papel crucial na patogênese da RD. Entretanto, os mecanismos moleculares envolvidos neste fenômeno não foram ainda totalmente elucidados. É fato conhecido que a via de sinalização da PKR (proteína quinase dependente de RNA) desempenha um papel fundamental na apoptose de neurônios, especialmente nas doenças neurodegenerativas. O objetivo principal deste trabalho foi investigar a expressão da via de sinalização RAX-PKR-eIF-2 'alfa'-ATF4, bem como identificar os micro-RNAs (miRNAs) que tenham como alvos os RNA mensageiros dos genes que codificam o RAX (PKR qssociated protein X) a PKR na retina de ratos tratados com estreptozotocina (STZ). Este modelo experimental de diabetes induz RD em ratos, a qual exibe todas as características bioquímicas, patofisiológicas e histofisiológicas da RD humana. A primeira etapa deste estudo foi avaliar a expressão de RNAm e de proteínas codificadas pelos genes RAX, PKR, ATF4 (Activating transcription factor 4) e eIF-2'alfa' (Fator de iniciação de transcrição-2 subunidade 'alfa') fosforilado na retina de ratos normais e diabéticos através de RT- PCR em tempo real e Western blot, respectivamente. A seguir, os seguintes tópicos foram investigados: 1) Localização celular do RAX, PKR e eIF-2 'alfa' na retina de ratos normais e diabéticos por
    imunofluorescência; 2) Identificação de miRNAs que possuam como alvos os genes RAX e PKR através de análise computacional; 3) Perfil de expressão dos miRNAs preditos na retina de ratos normais e diabéticos por RT -PCR em tempo real; 4) Localização celular de miRNAs na retina de ratos normais e diabéticos através de hibridização in situ; 5) Validação dos genes RAX e PKR como alvos dos miRNAs preditos através dos ensaios de luciferase e da inibição da proteína endógena e degradação do RNAm em células transfectadas com miRNAs sintéticos. Os resultados obtidos neste estudo revelaram que a expressão de RAX e eIF-2 'alfa' fosforilado foi induzida nas células da retina de ratos nos estágios iniciais da indução de diabetes com STZ. Por outro lado, a expressão da proteína PKR não foi alterada na fase inicial de diabetes, verificando-se uma diminuição significativa '15 GRAUS' dia após o tratamento com STZ. Com relação ao ATF4, a indução da sua expressão ocorreu somente após um mês de diabetes. Verificou-se ainda que o RAX, PKR e eIF-2 'alfa' são co-expressos nos neurônios da camada ganglionar e na camada nuclear interna da retina de ratos normais e diabéticos. O RAX apresentou uma distribuição citoplasmática, enquanto a PKR e eIF-2'alfa' foram detectados no núcleo. Além disso, demonstrou-se que o tratamento de ratos com STZ alterou o perfil de expressão dos miRNAs, miR-29b e miR-92, na retina. Os dados obtidos neste trabalho
    sugerem que o RAX seria um alvo indireto do miR-29b. Foi ainda possível demonstrar que o miR-29b é co-expresso com a proteína RAX nos neurônios da camada ganglionar da retina e apresenta um perfil de expressão temporal inverso ao encontrado para esta proteína. Estes resultados são relevantes, pois sugerem a participação do RAX e miR-29b na indução da apoptose de neurônios na retina de ratos diabéticos. Os resultados deste estudo poderão contribuir para o desenvolvimento de uma nova estratégia para o tratamento da RD a partir de injeção intravítrea do miR-29b. O uso recente de pequenos RNAs não-codificadores tais como miRNAs e RNA interferência para o tratamento de doenças humanas representa uma promissora e excitante área na pesquisa biomédica
  • Data de criação/publicação: 2009
  • Formato: 145 p. anexos.
  • Idioma: Português
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