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A Proteína ArfGAP com dois domínios plaquistrinos 2 (ADAP2) no sistema imune inato de galinhas

Guilherme Pereira Scagion Helena Lage Ferreira

2020

Localização: FMVZ - Fac. Med. Vet. e Zootecnia    (https://doi.org/10.11606/T.10.2020.tde-06052021-222715 )(Acessar)

  • Título:
    A Proteína ArfGAP com dois domínios plaquistrinos 2 (ADAP2) no sistema imune inato de galinhas
  • Autor: Guilherme Pereira Scagion
  • Helena Lage Ferreira
  • Assuntos: GALINHAS; SISTEMA IMUNE; VÍRUS; Adap2; Antiviral; Chicken Immune System; Innate Immunity; Interferon; Mavs; Stress Granules; Virus
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: Aves e mamíferos possuem algumas semelhanças em seu sistema imune inato, porém também apresentam diferenças pela sua divergência evolutiva. Alguns componentes da via do interferon (IFN) estão ausentes em células de galinha, como o gene RIG-I, IRF 3 e IRF 9. Outros componentes são únicos na resposta imune inata das galinhas, como o gene do receptor do tipo Toll 15 (TLR15). A via do IFN tipo I, ativa os genes estimulados por IFN (ISGs), os quais possuem um importante papel contra os vírus, estabelecendo o estado antiviral no hospedeiro. No entanto, os mecanismos moleculares dessa indução em aves são pouco compreendidos e podem ser evolutivamente distintos dos mamíferos. Em mamíferos, uma das proteínas responsivas ao vírus e reguladas por IFN é codificada pelo gene Arf-GAP com dois domínios plaquistrinos 2 (ADAP2, também conhecido como CENTA2 e Centaurina-β). A caracterização molecular e biológica da proteína ADAP2 de galinha (chADAP2) foi realizada neste estudo. Análises de bioinformática foram realizadas para identificar características da sequência de aminoácidos desta proteína e compará-las com as sequências obtidas de mamíferos. A expressão do gene chADAP2 foi calculada após a infecção em células de galinha (DF-1) com o vírus da influenza aviária (AIV) de dois subtipos (H2N1 e H5N1) em diferentes tempos. A localização da proteína chADAP2 e sua interação com a proteína MAVS de galinha (chMAVS) e grânulos de estresse (G3BP1) em células de galinhas foi acessada pela
    microscopia confocal e pela co- imunoprecipitação. A atividade antiviral foi avaliada após a transfecção de plasmídeos expressando as proteínas de chADAP2 em células infectadas com o subtipo H9N2 do AIV. Nossos resultados mostraram que as sequências de aminoácidos da proteína ADAP2 deram origem a dois clusters (mamíferos e aves) na análise filogenética. Após a infecção com os isolados AIV houve um aumento de expressão do gene chADAP2, entre o período de 0 a 48 horas em células aviárias. A co-localização entre as proteínas chADAP2, MAVS e grânulos de estresse (G3BP1) na região citoplasmática celular foi confirmada pela microscopia confocal. A interação entre chADAP2 e chMAVS foi também comprovada pela co-imunoprecipitação. Finalmente, a atividade antiviral foi confirmada pela diminuição de infecção de AIV em células transfectadas com o plasmídeo expressando a proteína chADAP2 em células de galinha. O presente estudo identificou que a proteína chADAP2 possui um papel semelhante ao descrito pela ADAP2 em células de mamíferos, apesar da distância genética das sequências de nucleotídeos e organização dos domínios proteicos entre eles. Nossos dados confirmam a interação entre os grânulos de estresse e as proteínas da resposta antiviral, com as proteínas chADAP2 e chMAVS envolvidas na cascata para expressão de IFN tipo I. Este é o primeiro relato sobre o papel chADAP2 em células aviárias. Este novo conhecimento sobre a resposta imune inata permitirá o desenvolvimento de
    ferramentas para o controle de infecções virais em aves.
  • Data de criação/publicação: 2020
  • Formato: 163 f il., tab.
  • Idioma: Português
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