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Caracterização molecular de elementos VanA em enterococos com genótipo e fenótipo discrepantes relativos à resistência aos glicopeptídeos

Priscila Moraes Henrique Ana Lúcia da Costa Darini

2007

Localização: FCFRP - Fac. Ciên. Farm. Ribeirão Preto    (Henrique, Priscila Moraes )(Acessar)

  • Título:
    Caracterização molecular de elementos VanA em enterococos com genótipo e fenótipo discrepantes relativos à resistência aos glicopeptídeos
  • Autor: Priscila Moraes Henrique
  • Ana Lúcia da Costa Darini
  • Assuntos: ENTEROCOCCUS; BIOLOGIA MOLECULAR; GLICOPEPTÍDEOS (RESISTÊNCIA)
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: Enterococos resistentes aos glicopeptídeos representam, atualmente, importantes patógenos causadores de infecção nosocomial, sendo isolados em várias regiões do mundo, inclusive no Brasil. Dos fenótipos de resistência descritos até o momento, VanA e VanB são os mais encontrados. O fenótipo VanA é caracterizado por linhagens resistentes a altos níveis de vancomicina e teicoplanina, enquanto VanB é representado por linhagens com altos níveis de resistência à vancomicina, mas com sensibilidade à teicoplanina. O fenótipo VanA é codificado por um grupamento de genes (vanRSHAXYZ) localizados em um elemento genético móvel denominado Tn1546 ou elemento VanA, freqüentemente inserido em plasmídeo conjugativo. Quatro linhagens de enterococos resistentes à vancomicina e sensíveis à teicoplanina que apresentaram genótipo vanA e fenótipo VanB foram estudadas com objetivo de se determinar qual o mecanismo responsável por esta incongruência. A identificação das espécies foi realizada por multiplex PCR, sendo três linhagens identificadas como Enterococcus faecalis e uma linhagem Enterococcus faecium. Todas confirinaram a presença do gene vanA por PCR e, no entanto, apresentaram sensibilidade à teicoplanina, determinada por Etest, condizente com o fenótipo VanB. Reações de Long-PCR e overlapping PCR foram realizadas para amplificação e caracterização do elemento VanA. O elemento VanA das linhagens de E. faecalis mostrou deleção da extremidade direita, cocrespondente à perda
    dos genes vanY e vanZ. Na linhagem de E. faecium foi detectada a inserção da ISEfa5 na região intergênica vanXY como reportado em estudo prévio. A tipagem molecular das linhagens foi realizada pelo perfil de PFGE após macrorestrição do DNA com enzima SmaI e indicou que duas linhagens de E. faecalis pertenciam ao mesmo clone, enquanto a outra era geneticamente não relacionada. Estudos de hibridação com sonda para localização do gene vanA indicaram que este gene estava associado a um plasmídeo de 70Kb. Para verificar a presença de eventuais mutações no gene vanS, relatadas em alguns estudos como causa da perda da sensibilidade à teicoplanina, os elementos VanA das linhagens foram seqüenciados, contudo nenhuma mutação foi encontrada. Os experimentos de clonagem para analisar a possível presença de uma região promotora entre os genes vanYe vanZindicaram a não existência de um promotor nesta região. A presença de elemento VanA com a mesma característica, sendo carreado por plasmídeos de mesmo tamanho em linhagens de E. faecalis com perfil de PFGE diferentes, sugere que este elemento foi transferido horizontalmente. O estudo molecular deste elemento de resistência gerou informações sobre a epidemiologia e eventos genéticos no elemento VanA que estão ocorrendo nas linhagens de VRE isoladas no Brasil
  • Data de criação/publicação: 2007
  • Formato: 70 p.
  • Idioma: Português
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