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Caracterização e otimização de culturas organotípicas de cérebro humano adulto

Niele Dias Mendes Luciano Neder; Adriano Sebollela

2015

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Mendes, Niele Dias )(Acessar)

  • Título:
    Caracterização e otimização de culturas organotípicas de cérebro humano adulto
  • Autor: Niele Dias Mendes
  • Luciano Neder; Adriano Sebollela
  • Assuntos: CÓRTEX CEREBRAL (ESTUDO E ENSINO); NEUROCIRURGIA; EPILEPSIA DO LOBO TEMPORAL; NEURÔNIOS
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: JUSTIFICATIVA: A cultura organotípica de cérebro humano adulto é uma importante plataforma de estudo em campos variados da ciência, porém pouco se conhece sobre a qualidade dessas fatias, fator de grande importância na interpretação dos resultados que acaba por impactar na hora de escolher esse método tão relevante para desenvolver pesquisas. Aliado a relevância do método, a obtenção do material não é prejudicial ao paciente, uma vez que para culturas organotípicas são utilizados pequenos fragmentos de córtex não patológico que são habitualmente removidos em procedimento cirúrgicos e posteriormente descartados. OBJETIVO: Estabelecer um protocolo robusto e otimizar o processo de preparo e manutenção de fatias de córtex cerebral humano adulto proveniente de cirurgias de lobectomia temporal que é habitualmente removida no tratamento cirúrgico da epilepsia do lobo temporal. MATERIAIS E MÉTODOS: Fragmentos de 1 X 1 X 1 cm de córtex humano adulto foram obtidos de 10 pacientes com ELT resistente a fármacos submetidos a lobectomia temporal parcial e amigdalo-hipocampectomia, e 5 cérebros de ratos, raça Wistar com 3 meses de idade, foram usados. Ambos os materiais foram imediatamente imersos em Hank’s gelado e oxigenado artificialmente. Os tecidos foram então fatiados em vibrátomo para obtenção de slices e colocados em cultura. Foram feitos testes com diferentes espessuras dos slices para avaliar se há melhora na viabilidade celular ao longo dos dias, que foi avaliada pelo ensaio de MTT. Em paralelo, a integridade tecidual e a quantificação dos tipo celulares foram feitas por H&E e imuno-histoquímica, respectivamente. A função neuronal foi avaliada por dosagem de ERK fosforilado após despolarização com KCl. RESULTADOS: Foi observado que os slices mais finos tiveram mais células viáveis, e que a redução do MTT foi preservada até o quarto dia de cultura. Análises histológicas
    revelaram que o tecido se manteve integro após o processamento, com aumento na quantidade de astrócitos, diminuição de células microgliais e estabilidade neuronal ao longo de 9 dias de cultura. CONCLUSÃO: As culturas organotipicas de córtex humano adulto provenientes de hipocampectomia em casos de epilepsia se mantem viáveis por vários dias em cultura
  • Data de criação/publicação: 2015
  • Formato: 65 p.
  • Idioma: Português
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