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Inovação no processo de fracionamento de plasma humano através do uso de cromatografia líquida de pseudoafinidade.

Feliciano, Gabriel Pinna

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Biotecnologia 2016-10-27

Acesso online. A biblioteca também possui exemplares impressos.

  • Título:
    Inovação no processo de fracionamento de plasma humano através do uso de cromatografia líquida de pseudoafinidade.
  • Autor: Feliciano, Gabriel Pinna
  • Orientador: Azevedo, Anita Mitico Tanaka; Cheng, Elisabeth
  • Assuntos: Cromatografia Líquida; Troca Aniônica; Fix; Pseudoafinidade; Fviii; Proteínas Dependentes De Vitamina K; Anion-Exchange; Pseudo-Affinity; Liquid Chromatography; Vitamin K Dependent Proteins
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Notas Locais: Programa Interunidades em Biotecnologia EP/FMVZ/IPT/IB/ICB/I. BUTANTAN;Nome do Programa Interunidades no site do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo; b Programa de Pós-Graduação Interunidades em Biotecnologia USP/IPT/I. BUTANTAN
  • Descrição: Neste trabalho mostramos que o método de purificação empregando a coluna ANX Sepharose FF, alternando eluições com CaCl2 (pseudoafinidade) e NaCl, permite obter concentrados do complexo protrombínico e do fator VIII em uma etapa cromatográfica. Testamos as colunas ANX e Q Sepharose FF, monolito QA e membrana Sartobind Q e os tampões citrato, MES e Bis-Tris. Empregando a ANX Sepharose FF e o tampão citrato as proteínas do complexo protrombínico eluiram com CaCl2 25 mM e o FVIII com NaCl 500mM. A recuperação da atividade de FVIII foi de cerca de 60% e o fator de purificação de 220 vezes. Na fração contendo as proteínas do complexo protrombínico foram identificadas por espectrometria de massas a presença de fibrinogênio, proteína C4 do complemento e C4b Binding Protein. A análise das frações mostra que a presença destas proteínas não é devido à variação da concentração de CaCl2, possivelmente se deve à difusão lenta destas através da resina. Mais de 99% das proteínas do plasma não são adsorvidas na coluna e podem ser purificadas em etapas posteriores.
  • DOI: 10.11606/D.87.2017.tde-21022017-113927
  • Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Biotecnologia
  • Data de criação/publicação: 2016-10-27
  • Formato: Adobe PDF
  • Idioma: Português
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