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Caracterização de cepas de Escherichia coli contendo diferentes alelos rpoS.

Galbiati, Heloisa Filus

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Ciências Biomédicas 2011-08-12

Acesso online. A biblioteca também possui exemplares impressos.

  • Título:
    Caracterização de cepas de Escherichia coli contendo diferentes alelos rpoS.
  • Autor: Galbiati, Heloisa Filus
  • Orientador: Spira, Beny
  • Assuntos: Escherichia Coli; Ativação Enzimática; Rna Polimerases; Mutação Genética; Genética Bacteriana; Escherichia Coli; Genetic Mutation; Enzyme Activation; Bacterial Genetics; Rna Polymerases
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Notas Locais: Microbiologia
  • Descrição: A bactéria Escherichia coli é encontrada em diversos habitats e deve estar preparada para sobreviver e crescer em condições desfavoráveis. A adaptação da bactéria a diferentes condições obriga-a a controlar a expressão de genes de forma eficiente. Uma das formas primárias de controle de expressão gênica é a competição entre os diversos fatores sigma pela ligação ao cerne da RNA polimerase. d70 é o fator sigma mais abundante e participa da transcrição da maioria dos genes de E. coli, enquanto que dS é o segundo em importância e reconhece promotores de genes relacionados à resposta geral ao estresse. O gene rpoS, que codifica para dS é altamente polimórfico, e adquiri mutações frequentemente. A mutação pontual C®T na posição 97 da ORF de rpoS, resulta em um códon de parada TAG (âmbar). Um Shine-Dalgarno alternativo e um códon de início de tradução na posição 157 dá início a uma proteína RpoS truncada, que é parcialmente funcional. Uma das situações de estresse na qual dS é ativado corresponde à privação de fosfato inorgânico. Porém, na limitação deste nutriente ocorre também a ativação do regulon PHO, cujos genes são predominantemente transcritos por d70. Neste trabalho, o efeito da versão truncada de RpoS sobre a expressão de genes dependentes de d70 (lacZ, phoA e pstS) e de genes dependentes de dS (osmY e proU) foi testado. Foram também realizados ensaios de estresse oxidativo, osmótico e pelo frio. O perfil de atividade parcial descrito para RpoSam pôde ser observado em alguns casos, porém em outros o comportamento deste alelo se assemelhou ao do mutante rpoS nulo. Paralelamente, foi testada também uma cepa de E. coli que carrega a mutação âmbar em rpoS, mas esta é suprimida, resultando na expressão de uma proteína RpoS normal. A proteína RpoS truncada não pôde ser visualizada em immunoblots, provavelmente porque esta é traduzida de forma pouco eficiente a partir do Shine-Dalgarno alternativo. Com o objetivo de incrementar a detecção de RpoS em ensaios de imuno-detecção, foi inserida por recombinação alélica uma etiqueta SPA altamente imunogênica na porção C-terminal da proteína.
  • DOI: 10.11606/D.42.2011.tde-26012012-142517
  • Editor: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Instituto de Ciências Biomédicas
  • Data de criação/publicação: 2011-08-12
  • Formato: Adobe PDF
  • Idioma: Português
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