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Análise da expressão, amplificação e deleção de EGFR e sua co-expressão com IL13R 2 em astrocitomas
Priscila Oliveira de Carvalho Suely Kazue Nagahashi Marie
2009
Localização:
FM - Fac. Medicina
(FM W4.DB8 SP.USP FM-2 C27an 2009 )
(Acessar)
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Análise da expressão, amplificação e deleção de EGFR e sua co-expressão com IL13R 2 em astrocitomas
Autor:
Priscila Oliveira de Carvalho
Suely Kazue Nagahashi Marie
Assuntos:
EXPRESSÃO GÊNICA
;
AMPLIFICAÇÃO DE GENES
Notas:
Tese (Doutorado)
Descrição:
O Receptor do Fator de Crescimento Epidérmico (do inglês, EGFR) é uma proteína de membrana celular que consiste em um domínio extracelular para o acoplamento do ligante e em um domínio intracelular apresentando sítio catalítico de tirosinoquinase. Em ~40% dos GBMs primários é observada a amplificação de EGFR resultando na sua hiperexpressão, o que raramente ocorre em GBM secundário. Mais da metade dos casos de GBM com amplificação do receptor é acompanhado de rearranjo do gene, uma forma deletada de EGFR (EGFRvIII). Adicionalmente, o receptor de interleucina 13 alfa-2 (IL-13R?2), apresenta-se abundante e especificamente hiperexpresso em gliomas de alto grau, em particular, GBM. O objetivo do presente estudo é analisar a expressão, amplificação, e deleção de EGFR em astrocitomas, bem como a co-expressão entre esse gene e o da IL-13R?2. Foram analisadas 145 astrocitomas (22 astrocitomas pilocíticos (AP); 22 astrocitomas grau II (AGII); 17 astrocitomas anaplásico (AA); e 84 GBM) e 17 tecidos cerebrais não tumorais provenientes de cirurgia de epilepsia. A deleção EGFRvIII foi analisada por RT-PCR, e confirmada por PCR em tempo real (RQ-PCR). A expressão relativa de EGFR e IL-13R?2 foi estudada por RQ-PCR utilizando-se o método SYBR Green, comparado ao tecido não tumoral, e normalizado para os genes de referência endógena, HPRT e Gus- . A amplificação de EGFR foi também determinada por RQ-PCR com relação ao gene da beta-hemoglobina, descrito como um gene de cópia
única. Foi realizada imunohistoquímica para analisar a expressão da proteína EGFR. A deleção EGFRvIII foi somente encontrada em GBM (19/84, 23%), demonstrando a exclusividade dessa alteração num grau tumoral de maior malignidade e uma diminuição da sobrevida desses pacientes (
p
= 0,030). A hiperexpressão de EGFR foi encontrada em 88 casos (61%), correspondendo a 50% de GBM, 88% de AA, e interessantemente em 77% de AGII e 64% de AP. Da mesma maneira, a ) Da mesma maneira, a hiperexpressão de IL-13R?2 foi encontrada em 74 casos (46%), correspondendo a 51% de GBM, 59% de AA, 36% de AGII e, surpreendentemente em 59% de AP. Embora tenha havido um aumento de expressão de ambos os genes em todos os graus de astrocitomas, não houve co-expressão dos mesmos. A amplificação de EGFR foi observada em 29 casos (20%) correspondendo a 31% de GBM e ainda um caso para cada um dos demais graus de astrocitomas, sendo que dos 29 casos amplificados, 21 apresentaram idade superior a 45 anos (
p
< 0,001) e 50% dos casos de GBM com amplificação, apresentaram simultaneamente a forma EGFRvIII. Adicionalmente, o acúmulo citoplasmático da proteína foi detectado em 74 casos (51%), correspondendo a 55% de GBM, 47% de AA, 54,5% de AGII e 37% de AP, além de um pequeno acúmulo nuclear em alguns casos de astrocitomas difusamente infiltrativos (15%). Assim, a alta freqüência de hiperexpressão dos genes estudados em todos os graus de astrocitomas, principalmente a amplificação de EGFR e a
presença da deleção EGFRvIII entre os astrocitomas de alto grau, especialmente em GBM, associados aos dados clínicos dos pacientes, contribuem com estudos recentes e, juntos, direcionam as futuras opções terapêuticas em câncer, salientando a importância da análise de expressão molecular, protéica e das alterações mutacionais que envolvem genes candidatos, em particular, os genes EGFR e IL-13R?2
Data de criação/publicação:
2009
Formato:
149 p anexos.
Idioma:
Português
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