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Sequência e caracterização molecular de um cDNA que codifica a Sm 21,6 de Schistosoma mansoni

Luciene Medeiros Vanderlei Rodrigues

2000

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto (Medeiros, Luciene )(Acessar)

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Título:
Sequência e caracterização molecular de um cDNA que codifica a Sm 21,6 de Schistosoma mansoni
Autor: Luciene Medeiros
Vanderlei Rodrigues
Assuntos: IMUNOLOGIA
Notas: Dissertação (Mestrado)
Descrição: O principal objetivo do projeto Genoma do Schistosoma é a descoberta e a caracterização de novos genes na tentativa de encontrar novos alvos para droga, o desenvolvimento de vacinas e são de grande importância para o entendimento de sua biologia, os mecanismos de resistência a drogas e variação antigênica. Uma biblioteca 'lâmbda' ZAP II de cDNA de vermes adultos, foi rastreada usando como sonda, um cDNA de S. mansoni em condições de baixa extringência (KAGEYAMA, 2000). Um dos clones positivos mostrou homologia parcial com antígenos do tegumento e foi completamente sequenciado no sequenciador ALF Express (Pharmacia) e apresentou 789 pb. Uma análise computacional (Dnasis) desse cDNA revelou uma única ORF codificando uma proteína de 183 aminoácido com uma massa molecular de 21,6 D. A comparação da sequência do peptídeo Sm 21,6 com outras seqüências membros da família de antígenos de tegumento de S. mansoni. Essa proteína mostrou sítios para glicosilação, fosforilação, miristoilação e domínio ligante de cálcio. O DNAg foi digerido com as enzimas Pst I, Eco RI, Eco RI-Xho das quais não cortam o cDNA e com Hae III que corta esse cDNA. Um "Southern blot" desse DNAg digerido, usando como sonda aocDNA da Sm 21,6 marcada ("Gene Image Kit") mostrou apenas uma cópia por genôma haplóide. A expressão desse gene não foi estágio específico pois a mensagem foi observada em cercárias, ovos, esquistossômulo e vermes adultos machos e fêmeas, por "Dot blot", RT-PCR e PCR. O vetor de
expressão pFAST-Sm 21,6 foi construído usando um procedimento de clonagem "blunt-end" e sequenciado no sequenciador automático ABI. A proteína recombinante será usada para avaliar a atividade de cálcio e produção de anticorpo. Contudo, futuras análises imunoquímicas serão relevantes para imuno-localização e para estudar imunidade de proteção
Data de criação/publicação: 2000
Formato: 64 p.
Idioma: Português

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