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Isolamento de mutantes nocaute de Xanthomonas Axonopodis PV citri afetados nos genes male e moda codificadores de componentes ligadores do sistema de captação de maltose e molibdato respectivamente

Elisa Emiko Oshiro A. F Balan; Luís Carlos de Souza Ferreira; Rita de Cássia Café Ferreira; Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas (4. 2005 São Paulo)

Resumos São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2005

São Paulo Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP 2005

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  • Título:
    Isolamento de mutantes nocaute de Xanthomonas Axonopodis PV citri afetados nos genes male e moda codificadores de componentes ligadores do sistema de captação de maltose e molibdato respectivamente
  • Autor: Elisa Emiko Oshiro
  • A. F Balan; Luís Carlos de Souza Ferreira; Rita de Cássia Café Ferreira; Congresso do Instituto de Ciências Biomédicas (4. 2005 São Paulo)
  • Assuntos: MICROBIOLOGIA
  • É parte de: Resumos São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2005
  • Notas Locais: Disponível somente em CD-ROM
  • Descrição: Objetivos: Gerar mutantes Xanthomonas axonopodis pv citri afetados nos genes malE e modA dos sistemas de captação de maltose e molibdato, utilizando técnicas de mutagênese sítio dirigida do tipo nocaute por inserção de cassete de resistência a espectinomicina. Métodos e Resultados: Uma cópia mutada do gene malE foi gerada pela clonagem de um cassete de resistência a espectinomicina dentro d o s'tio de Eco RI localizado 571 e 751pb do gene clonado. Uma cópia mutada do gene modA foi obtida pela mesma estratégia usando o sítio de BamHI localizado na posição 363pb do gene clonado. Os genes mutados foram subclonados em um plasmídeo suicida derivado R6K gerando pMalE36 e pModA35. O resultado do plasmídeo recombinante foi introduzido dentro da linhagem Xac 306 por eletroporação usando condições otimizadas previamente pelo nosso grupo. Colônias foram selecionadas por troca alélica após dois passos de procedimentos baseados primeiramente na resistência a espectinomicina, e o segundo passo, pela resistência a sacarose, devido a perda do gene sacB presente no vetor suicida. Colônias resistentes a espectinomicina e a sacarose mostraram carregar o alelo mutado como um resultado de um evento de dupla recombinação, como demonstrado pelas análises de "Southern blot" e PCR. Conclusão: Foi possível criar linhagens mutadas de Xac 306, nos genes modA e malE por meio de recombinação sitio específica. O papel fisiológico dos sistemas de captação poderão ser avaliados em ensaios cujas
    fontes nutricionais são maltose e molibdato
  • Editor: São Paulo Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
  • Data de criação/publicação: 2005
  • Formato: res. 60.
  • Idioma: Português
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