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Organização de extremidades cromossômicas em Leishmania major

André Luiz Pedrosa Angela Kaysel Cruz

2001

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Pedrosa, André Luiz )(Acessar)

  • Título:
    Organização de extremidades cromossômicas em Leishmania major
  • Autor: André Luiz Pedrosa
  • Angela Kaysel Cruz
  • Assuntos: LEISHMANIA (GENÉTICA); BIOQUÍMICA
  • Notas: Tese (Doutorado)
  • Descrição: As extremidades dos cromossomos do parasito protozoário Leishmania major são protegidas por repetições hexanucleotídicas (GGGTTA). Em outras espécies de protozoários, como Plasmodium falciparum e Trypanosoma brucei, genes presentes nestas regiões estão envolvidos em processos biológicos importantes. Com o objetivo de caracterizar as extremidades dos cromossomos de L. major, isolamos três clones a partir de uma genoteca da linhagem LV39 que carregam as repetições hexaméricas. Os clones foram denominados B1, B2 e E8 e associados às extremidades dos cromossomos 3, 7, e 20, respectivamente. A análise da distribuição das seqüências provenientes dos clones no genoma de Leishmania indica a existência de, pelo menos, duas classes de extremidades cromossômicas: uma composta quase exclusivamente por arranjos de seqüências únicas e outra composta por arranjos de seqüências únicas e reiteradas. Baseados em trabalhos anteriores, definimos uma estratégia para mapear os transcritos usando transfectantes que albergassem os cosmídeos mantidos sob alta pressão da droga de seleção. Os resultados obtidos indicam que há transcrição gênica em regiões próximas às repetições teloméricas, uma vez que detectamos a presença de transcritos super ? expressos específicos para cada clone. Somente quando os fragmentos contendo as repetições teloméricas testados não observamos os níveis basais de transcrição, indicando que as extremidades dos cromossomos de Leishmania sejam silenciadas ou
    que apresentem genes não funcionais ou truncados. O seqüenciamento de uma das extremidades do cromossomo 20 (representada pelo clone E8) foi realizado utilizando?se uma estratégia baseada na utilização de elementos transponíveis e revelou a presença de um novo elemento repetitivo, denominado LST?8378. A anotação das seqüências geradas a partir do clone E8 revelou a presença de 10 ORFs preditas, que estão concordância os mapas ) de transcrição gerados através de experimentos de northern blots. Entre as ORFs anotadas, duas delas correspondem às isoformas citosólicas e glicossômica da fosfoglicerato quinase (PGKB e PGKC), respectivamente) presentes em Leishmania. Sabendo que a expressão da isoforma citosólica da PGK é tóxica para as formas sangüíneas de T. brucei, induzimos a super-expressão das isoformas PGKB e PGKC em formas promastigotas de Leishmania. A super-expressão da isoforma citosólica levou a uma redução na taxa de crescimento do parasito, o que abre a possibilidade de se estudar o envolvimento das diferentes isoformas da PGK no metalismo de Leishmania
  • Data de criação/publicação: 2001
  • Formato: 100 p anexos.
  • Idioma: Português
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