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Extremidades telométricas de Leishmania major estudos sobre o locus das fosfoglicerato quinases e sequenciamento parcial de extremidade do cromossomo 7

Aline de Azevedo Angela Kaysel Cruz

2004

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Azevedo, Aline )(Acessar)

  • Título:
    Extremidades telométricas de Leishmania major estudos sobre o locus das fosfoglicerato quinases e sequenciamento parcial de extremidade do cromossomo 7
  • Autor: Aline de Azevedo
  • Angela Kaysel Cruz
  • Assuntos: LEISHMANIA; GENÉTICA MOLECULAR; BIOLOGIA CELULAR; BIOLOGIA MOLECULAR
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: Nosso objetivo central foi o estudo funcional de um transcrito presente em extremidade telomérica, e a escolha recaiu sobre os genes que codificam para as isoformas glicossômica (PGKC) e citosólica (PGKB) da fosfoglicerato quinase, presentes em uma das extremidades do cromossomo 20 de Leishmania major. Uma das razões para o estudo destas isoformas foi a existência de resultados preliminares que indicavam um possível efeito negativo da superexpressão da isoforma citosólica sobre a taxa de multiplicação de promastigotas (efeito bem caracterizado em Trypanosoma brucei). Os fragmentos de DNA contendo os genes correspondentes a estas duas isoformas foram clonados em pX63Neo e transfectados em L. major, para sua superexpressão e nossos resultados não confirmaram o referido efeito negativo sobre a taxa de multiplicação do transfectante superexpressor da isoforma citosólica. Por outro lado, os estudos destes dois genes nos revelaram algumas características interessantes, entre elas as diferenças marcantes no número de cópias do epissomo e nos níveis de seus transcritos, quando incrementos na concentração de droga de seleção foram utilizados. Análises de Southern blot mostraram que o número de cópias de epissomos é similar entre o superexpressor da PGKB e o transfectante controle (vetor sem inserto) e muito superior ao número de cópias observado no transfectante que superexpressa a PGKC, quando nas concentrações máximas da droga (aproximadamente 18 vezes). Disparidade
    similar foi observada nas análises por northern blot que mostraram que o transfectante superexpressando a isoforma glicossômica (PGKC) apresenta sempre níveis de transcrito inferiores aos níveis da isoforma citosólica (PGKB). Análise da quantidade de proteínas por imunodetecção revelou que não há correlação entre o nível de transcrito e produto de tradução, sendo que a isoforma glicossômica apresentou-se em maior quantidade. No transfectante ... superexpressor de PGKC detectamos de 3 a 5 vezes mais proteína (isoforma glicossômica) do que no transfectante superexpressor de PGKB. Nossos dados sugerem que há algum elemento presente na região 5' ou 3' UTR da PGKC que controla a replicação do epissomo interferindo no nível de transcrito correspondente. Nossos achados são relevantes para entender o controle da replicação e regulação da transcrição nesse organismo. Paralelamente, um cosmídeo recombinante (clone 008B2) representando uma das extremidades do cromossomo 7 de Leishmania major foi seqüenciado parcialmente. No processo de seqüenciamento utilizamos o sistema mariner de transposição in vitro. para facilitar a montagem do contig final que ainda assim foi dificultada pela presença de seqüências repetitivas
  • Data de criação/publicação: 2004
  • Formato: 59 p.
  • Idioma: Português
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