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A proteína Flower Expressed F-BOX 1 (FEF1) regula o tamanho final dos órgãos férteis de Nicotiana tabacum e interage com SKP1 e fatores de transcrição

Patrícia Dalcin Martins Maria Helena de Souza Goldman

2017

Localização: FMRP - Fac. Medicina de Ribeirão Preto    (Martins, Patrícia Dalcin )(Acessar)

  • Título:
    A proteína Flower Expressed F-BOX 1 (FEF1) regula o tamanho final dos órgãos férteis de Nicotiana tabacum e interage com SKP1 e fatores de transcrição
  • Autor: Patrícia Dalcin Martins
  • Maria Helena de Souza Goldman
  • Assuntos: GENÉTICA; PROTEÍNAS; PROLIFERAÇÃO CELULAR
  • Notas: Dissertação (Mestrado)
  • Descrição: Proteínas F-box geralmente se associam a complexos ubiquitina-ligase do tipo SCF (SKP1-CULLIN-F-BOX) para ubiquitinar proteínas e, assim, marca-las para degradação pelo proteassoma 16S. As proteínas F-box conferem especificidade ao sistema, interagindo com as proteínas alvo de ubiquitinação. FLOWER EXPRESSED F-BOX 1 (FEF1) é uma F-box que possui domínios do tipo kelch, que foi identificada na biblioteca de cDNAs de estigmas/estiletes de Nicotiana tabacum - TOBEST (Quiapim et al., 2009). Para estudar o papel de FEF1 no organismo modelo N. tabacum, o presente trabalho analisou o fenótipo de duas linhagens de transgênicos independentes de silenciamento e duas linhagens de transgênicos independentes de superexpressão de FEF1, previamente desenvolvidas por Abbad (2012). As alterações mais evidentes ocorreram nas flores dos transgênicos de FEF1. De forma geral, os transgênicos de silenciamento apresentaram ovários mais estreitos e pistilos mais curtos em relação às plantas-controle. Os transgênicos de superexpressão de FEF1 apresentaram ovários mais largos, e uma das linhagens de superexpressão apresentou pistilos mais alongados e área estigmática maior do que as plantas-controle. O comprimento do filete dos transgênicos também foi analisado, bem como sua relação com o comprimento do pistilo. Em ambos os transgênicos de superexpressão foi observado um alongamento do filete, sendo que em uma das linhagens de transgênicos analisados, o alongamento do filete não acompanhou o alongamento do pistilo, causando um distanciamento entre estes dois órgãos, os quais nas plantas-controle se encontram na mesma altura. Análises em cortes longitudinais de estigmas dos transgênicos foram realizadas para verificar a causa, a nível celular, das alterações observadas. Estas análises revelaram que tanto a área da zona secretória do estigma quanto a área parenquimática dos
    estigmas dos transgênicos de superexpressão de FEF1 aumentaram em relação aos estigmas-controle. Pouca variação das mesmas áreas foi observada nos estigmas de silenciamento de FEF1. Análises nos mesmos cortes histológicos revelaram que a área média das células do parênquima é aproximadamente a mesma nos transgênicos de silenciamento e de superexpressão e também no controle. Dessa forma, o aumento da área observado nos estigmas de superexpressão de FEF1 provavelmente ocorreu devido a um maior número de células nesse órgão. Estudos anteriores apontaram a interação entre FEF1 e a proteína SKP1, e os fatores de transcrição TCP11, TCP13 e TCP15 através de um screening de duplo-hibrido (Abbad, 2012; Roberto, 2015). No presente trabalho foi verificado que FEF1 interage com três diferentes SKP1, as quais estão entre as mais expressas em estigmas/estiletes de N. tabacum. Também foi verificado que a interação de FEF1 com SKP1 ocorre através do domínio F-box, como descrito para outras proteínas F-box relatadas na literatura (Bai et al., 1996). Além disso, foi confirmada a interação de FEF1 com TCP11 e TCP15 através do ensaio de Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC). A interação da proteína FEF1Δ Kelch (1-185aa) apresentou interação com TCP1 1 e TCP 13, o que levou a uma nova análise dos domínios de FEF1. Esta análise revelou um domínio Kelch (denominado Kelch 1) upstream aos dois domínios Kelch previamente descritos por Abbad (2012), o qual provavelmente foi o responsável pela interação entre FEF1ΔKelch e as TCPs. Os dados reunidos por este trabalho superem que FEF1 é uma F-box que regula o tamanho final do pistilo, controlando a proliferação celular nesse órgão, através da interação com fatores de transcrição como as TCP 11, TCP13 e TCP15
  • Data de criação/publicação: 2017
  • Formato: 106 p.
  • Idioma: Português
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