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Engenharia metabólica da levedura Yarrowia lipolytica para a produção heteróloga do monoterpeno geraniol.

Queiroz, Enzo Bento

Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Escola Politécnica 2023-06-28

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  • Title:
    Engenharia metabólica da levedura Yarrowia lipolytica para a produção heteróloga do monoterpeno geraniol.
  • Author: Queiroz, Enzo Bento
  • Supervisor: Basso, Thiago Olitta
  • Subjects: Bioprocessos; Biotecnologia; Engenharia Genética; Fungos; Terpenos; Bioprocess Engineering; Yarrowia; Terpene; Metabolic Engineering; Geraniol; Yeast
  • Description: Geraniol é um monoterpeno, classe de metabólitos secundários de plantas, usado como fragrância em diversos produtos de higiene e cosméticos. Além disso, essa molécula apresenta potencial como fármaco antimicrobiano e antitumoral, por exemplo, e é precursor químico de outros compostos relevantes para a indústria e saúde humana. Apesar de seu mercado crescente, a obtenção de geraniol se restringe à extração de óleos essenciais vegetais ou à síntese química, processos com etapas pouco eficientes, caras ou poluentes. Nesse contexto, o uso da engenharia metabólica para a produção de terpenos por microrganismos é uma alternativa promissora que tem sido explorada no meio científico. Yarrowia lipolytica, uma levedura oleaginosa não convencional, apresenta atributos que podem ser explorados para a produção sustentável e eficiente de geraniol. Essas características incluem tolerância a compostos orgânicos e altos níveis de acetil-CoA citosólico, molécula que inicia a via de biossíntese do monoterpeno. Assim, o presente projeto teve como objetivo o desenvolvimento de linhagem de Y. lipolytica capaz de realizar a biossíntese de geraniol. Para isso, a linhagem de Y. lipolytica que seria transformada foi analisada quanto ao seu crescimento e morfologia celular e sua fisiologia de crescimento foi estudada. Então, os plasmídeos necessários para expressão da geraniol sintase (GES) e sua integração no genoma de Y. lipolytica foram replicados e confirmados. Finalmente, foi aplicado o método de CRISPR-Cas9 para a expressão da enzima GES de Catharanthus roseus na linhagem de Y. lipolytica com modificações para a produção de monoterpenos. Integração do cassete foi confirmada por PCR com DNA genômico como molde. Produção de 35 ± 10 mg L-1 de geraniol (que representa um rendimento de 0.08 % C-mol C-mol-1) pela linhagem BYa3105 geneticamente modificada foi verificada por GC-MS. Portanto, as bases para produção de geraniol foram estabelecidas e poderão ser adicionalmente exploradas nas próximas etapas do projeto. Esse é o primeiro relato conhecido da biossíntese de novo de geraniol por Y. lipolytica.
  • DOI: 10.11606/D.3.2023.tde-29082023-074023
  • Publisher: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP; Universidade de São Paulo; Escola Politécnica
  • Creation Date: 2023-06-28
  • Format: Adobe PDF
  • Language: Portuguese
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