skip to main content
Idioma:

Expressão e autoativação da CASPASE-7 humana

J Alves H M Garay; G A H Majczak; D S Persike; José Ernesto Belizário; Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV (2002 São Paulo)

Resumos São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002

São Paulo Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP 2002

Item não circula. Consulte sua biblioteca.(Acessar)

  • Título:
    Expressão e autoativação da CASPASE-7 humana
  • Autor: J Alves
  • H M Garay; G A H Majczak; D S Persike; José Ernesto Belizário; Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV (2002 São Paulo)
  • Assuntos: FARMACOLOGIA
  • É parte de: Resumos São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002
  • Notas Locais: Disponível em CD-ROM
  • Descrição: Objetivo: Caspases são aspártico-proteases envolvidas nas fases de iniciação e execução da apoptose. O processamento e ativação da forma inativa (zimógeno) é dependente da aproximação, oligomerização e auto-clivagem pela forma zimógeno da enzima. Nossos estudos iniciais mostraram que as caspases 1, 2, 4, 5, 6, 7, 8, 9 e 10 apresentam uma região rica dos aminoácidos prolina (P), glutamato/aspartato (E), Serina (S), treonina (T), denominada região PEST, na seqüência que controla a auto-ativação da enzima. É nosso objetivo mostrar se mutações nessa região altera o mecanismo de auto-ativação da enzima. Métodos e Resultados: Bactérias E coli BL21 (DE3) foram transformadas com o plasmídeo pHis8 contendo a forma His-Tag do gene de caspase-7 humana (Image clone 563750). Após indução com IPTG, a expressão e atividade da caspase-7 foram acompanhadas através de eletroforese em gel PAGE e atividade proteolítica sobre o substrato fluorogênico z-DEVD-AMC, respectivamente. Esses experimentos mostraram que a pro-forma da enzima (massa molecular 32 kDa) e a forma ativada (subunidades p20 e p12) estavam presentes no lisado bacteriano. Essas formas foram purificadas em coluna de afinidade HisTrap e a atividade enzimática foi testada na ausência e presença de peptídeos inibidores de caspases z-DEVD-fmk e Z-VAD-fmk, verificando-se que 90-100% da atividade era inibida Em seguida, técnicas de mutagênese sítio dirigida por PCR foram utilizadas para construção de um clone mutante
    contendo as substituições S199A e P201A. O clone foi inserido no plasmídeo de expressão em procarioto pGEX-4T. Os testes de atividade da enzima mutante serão realizados no futuro. Conclusões: A presença da forma ativa (p20, p12) da caspase-7 recombinante humana sugere um mecanismo de auto-ativação da enzima durante sua expressão na bactéria E. coli. O modelo parece ser adequado para os estudos futuros visando esclarecer o papel da região PEST no mecanismo de auto-ativação da enzima
  • Editor: São Paulo Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
  • Data de criação/publicação: 2002
  • Formato: 1. (várias paginações) poster 155.
  • Idioma: Português
Links
Voltar para lista de resultados
Ir para página anteriorAnterior Resultado  8 AvançarIr para próxima página

  • Realização: ABCD-USP USP   Logos de Redes Sociais: Freepik

Buscando em bases de dados remotas. Favor aguardar.