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Isolation and characterization of cytoplasmic and chloroplastic 5S RNAs in the unicellular green alga chlorella

Galling, G. ; Jordan, B.R.

Biochimie, 1972, Vol.54 (10), p.1257-1265 [Periódico revisado por pares]

France: Elsevier Masson SAS

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  • Título:
    Isolation and characterization of cytoplasmic and chloroplastic 5S RNAs in the unicellular green alga chlorella
  • Autor: Galling, G. ; Jordan, B.R.
  • Assuntos: Chlorella - analysis ; Chlorophyta - analysis ; Chloroplasts - analysis ; Chromatography ; Cytoplasm - analysis ; Electrophoresis, Polyacrylamide Gel ; Freshwater ; Mutation ; Phosphorus - metabolism ; Phosphorus Isotopes ; Rifampin - pharmacology ; RNA, Ribosomal - isolation & purification ; Uridine - metabolism
  • É parte de: Biochimie, 1972, Vol.54 (10), p.1257-1265
  • Notas: ObjectType-Article-1
    SourceType-Scholarly Journals-1
    ObjectType-Feature-2
    content type line 23
  • Descrição: Two distinct bands of 5S RNA are observed on acrylamide gel electrophoresis of RNA prepared from whole chlorella cell homogenates; analysis of the RNA extracted from chloroplastic and cytoplasmic ribosomes shows that the faster band is chloroplastic 5S RNA and the slower band cytoplasmic 5S RNA. Analysis of chloroplastdamaged mutants, labeling with 32P in the presence of rifampicin and specific labeling of chloroplastic ribosomal RNA with uridine all confirm this identification. The T 1 oligonucleotide patterns (« fingerprints ) of the two molecules are quite different (only 4 common oligonucleotides) and show that the two molecules are not closely related. However, some features of their conformation must be similar since after partial hydrolysis with T 1 RNAse they both separate — in the presence of urea — in two pieces approx. 32 and 88 nucleotides long. L'analyse par électrophorèse sur gel d'acrylamide de RNA extrait de cellules de Chlorella met en évidence deux bandes distinctes de RNA 5S. Comme le montre l'analyse de RNAs obtenus à partir de ribosomes cytoplasmiques et chloroplastiques, la bande qui migre le plus rapidement provient du chloroplaste et la bande plus lente du cytoplasme. Cette conclusion est confirmée par l'étude de mutants dont le chloroplaste est altéré, par l'analyse des RNAs synthétisés en présence de rifampicine et par marquage spécifique du RNA chloroplastique à l'aide d'uridine. Les « fingerprints des deux molécules sont très différents : quatre oligonucléotides seulement sont communs aux deux RNAs 5S, qui ne doivent donc pas présenter une grande homologie. Néanmoins, ils présentent un comportement très semblable vis-à-vis d'une hydrolyse partielle à la RNAse T 1 (apparition dans les deux cas de deux fragments complémentaires longs d'environ 32 et 88 nucléotides) qui indique l'existence de certaines analogies de conformation. Die aus Zellhomogenaten von Chlorella extrahierte RNS zeigt bei Acrylamid-Gelelektrophorese zwei Komponenten von 5S RNS. Durch Analyse der RNS chloroplastidärer und cytoplasmatischer Ribosomen lässt sich nachweisen, dass die schneller wandernde Bande dem Chloroplasten, die langsamere dem Cytoplasma zuzuordnen ist. Die Befunde werden bestätigt durch Versuche mit einer Plastiden-geschädigten Mutante, durch 32P-Markierung in Gegenwart von Rifampicin und durch die spezifische Markierung der chloroplastidären Ribosomen-RNS mit Uridin. Nach Hydrolyse mit Ribonuclease T 1 und zweidimensionaler Elektrophorese (« fingerprinting ) ist das Oligonucleotidmuster der beiden 5S RNS völlig veschieden. Es finden sich nur 4 gemeinsame Oligonucleotide [G, AAG, UG und UUG]. Dies zeigt, dass die Basensequenz der beiden Moleküle nicht sehr ähnlich sein kann. Immerhin müssen einige strukturelle Ahnlichkeiten bestehen, da nach partieller Hydrolyse mit Ribonuclease T 1 jeweils 2 Fragmente pro Molekül entstehen, die sich in Gegenwart von 8 M Harnstoff trennen und etwa 32 und 88 Nucleotide enthalten.
  • Editor: France: Elsevier Masson SAS
  • Idioma: Inglês
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