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Ativação das caspases -2, -3, -8 e -9 durante a apoptose de células wehi-164 estimuladas com TNFalfa correlações com a perda do potencial de membrana mitocondrial

S C Enns João Gustavo Pessini Amarante-Mendes; José Ernesto Belizário; Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental (15. 2000 Caxambu)

São Paulo : FESBE, 2000 Resumos

São Paulo FESBE 2000

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  • Título:
    Ativação das caspases -2, -3, -8 e -9 durante a apoptose de células wehi-164 estimuladas com TNFalfa correlações com a perda do potencial de membrana mitocondrial
  • Autor: S C Enns
  • João Gustavo Pessini Amarante-Mendes; José Ernesto Belizário; Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental (15. 2000 Caxambu)
  • Assuntos: IMUNOLOGIA
  • É parte de: São Paulo : FESBE, 2000 Resumos
  • Descrição: Objetivo: A exposição de células do fibrosarcoma de roedores WEHI-164 ao TNF induz os eventos típicos da morte celular por apoptose, incluindo a clivagem do DNA genômico, a condensação e fragmentação da cromatina e ativação de ensimas caspases. O objetivo deste estudo foi analisar a ordem de ativação das enzimas caspases 2, 3, 8 e 9 e suas correlações com queda no potencial da membrana mitocondrial, bem como, com as alterações na expressão celular e o início e progressão da apoptose.Métodos e Resultados: A análise do conteúdo de DNA e distribuição de células nas fases do ciclo celular, por citometria de fluxo, mostrou que uma parte da população de células estimuladas com TNF 0.5 ng/ml sofre um bloqueio na fase G1, enquanto que as células em S continuam no ciclo celular. Nesta dose, a apoptose é induzida a partir de 4 horas de incubação. Na dose de 100 ng/ml ocorre um rápido aumento no número de células apoptóticas e a extrusão do fosfolipídeo fosfatidilserina para porção externa da membrana plasmática, como determinado pelo método da Anexina V-FITC. ) Em ambos os casos a morte celular pode ser inibida em presença do peptídeo inibidor de caspases de amplo espectro, Z-VAD-fmk, pelo inibidor de caspase-3, DVED-fmk (parcial) e pelo inibidor de caspase-8, IETD-fmk. Utilizando substratos fluorogênicos específicos, mostramos que TNF, na dose 0.5 ng/ml, induz um aumento seqüencial na atividade proteolítica das caspases 8, 2 e 3, enquanto, na dose 100 ng/ml, além de um aumento
    expressivo da atividade destas três caspases, notamos também a ativação de caspase- 9. A análise de variações no potencial de membrana mitocondrial pelo método do DIOC6 mostrou que existe uma correlação direta entre o índice de apoptose e a perda da capacidade de retenção deste fluoróforo dentro da mitocondrias.Conclusões: A ativação diferencial de caspase-9 em células incubadas com TNF 100 ng/ml parece estar associada a eventos metabólicos e ultra-estruturais na mitocôndria, que estão sendo investigados em mais detalhes
  • Editor: São Paulo FESBE
  • Data de criação/publicação: 2000
  • Formato: p. 99, res.31.011.
  • Idioma: Português
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